试验十二叶绿素的定量测定分光光度法.doc

实验二十叶绿素含量的测定叶绿素的含量与植物光合作用及氮素营养有密切的关系,在科学施肥、育种及植物病理研究上常有测定的需要。方法Ⅰ一、目的掌握叶绿素含量测定的基本原理和方法。二、原理叶绿素与其他显色物质一样,在溶液中如液层厚度不变则其吸光度与它的浓度成一定的比例关系。已知叶绿素a、b在652nm波长处有相同的比吸收系数()。因此,在此波长下测定叶绿素溶液的吸光度,即可计算出叶绿素a、b的总量。三、材料、:菠菜叶;芥菜叶或其他植物叶片。:电子分析天平;分光光度计;漏斗;25ml容量瓶;剪刀;滤纸;玻棒等。:95﹪乙醇、石英砂、碳酸钙粉。四、(可视叶片叶绿素含量增减用量),剪碎放入研钵中,加少量碳酸钙粉和石英砂及3~5ml95﹪乙醇研成匀浆,再加约10ml95﹪乙醇稀释研磨后,用滤纸过滤入25ml容量瓶中,然后用95﹪乙醇滴洗研磨及滤纸至无绿色为止,最后定容至刻度,摇匀,即得叶绿素提取液。,倒入叶绿素提取液距杯口1cm处,以95﹪乙醇为空白对照,在652nm波长下读取吸光度(A)值。五、计算将测得的吸光度A652值代入公式(1),即可求得提取液中叶绿素浓度。所得结果再代入公式(2),即可得出样品中叶绿素含量(mg·g-1Fw)。A652C(-1)=————(1):C—叶绿素(a和b)的总浓度(mg·ml-1)50A652—(比色杯光径为1cm,样品浓度为1g·L-1时的吸光度)。C(-1)×提取液总量(ml)叶绿素含量(-1Fw)=————————————————(2)样品鲜重(g)方法Ⅱ一、目的掌握叶绿素a、b含量测定的基本原理和方法。二、原理叶绿素a、b分别在663nm和645nm波长处有最大的吸收峰,同时在该波长处叶绿素a.、b的比吸收系数K为已知,我们即可以根据Lambert-Beer定律,列出浓度C与吸光度A之间的关系式:A663=+……………………(1)A645=+……………………(2)(1)、(2)。Ca、、Cb为叶绿素a、b的浓度,单位为mg·L-1。、、b在波长663nm下的比吸收系数。、、b在波长645nm下的比吸收系数。解(1)、(2)式联立方程,得:Ca=–……………………(3)Cb=–……………………(4)CT=Ca+Cb=+……………………(5)Ca、Cb为叶绿素a、b的浓度,CT为总叶绿素浓度,单位:(mg·L-1),.利用上面(3)、(4)、(5)式可以分别计算出叶绿素a、b及总叶绿素浓度。三、材料、:菠菜叶、:电子分析天平;分光光度计;恒温水浴锅;25ml刻度试管;剪刀;试管;试管架;玻棒等。:80﹪乙醇。四、