双向操作手册.doc

一、溶液配制:1裂解液Ⅰ:(猪肉,外文MS2005年)extractionbuffer20ml7Murea7×20×10-3×= 2×20×10-3×=%(w/v)DTT1%×20=%(w/v)CHAPS2%×20=×10-3×20×10-3×=(EDTA-2Na)1×10-3×20×10-3×=%%×20ml=Ⅱ:(大弹涂鱼肝脏组织,中文生命科学仪器2009)extractionbuffer20ml7Murea7×20×10-3×=×20×10-3×=%(w/v)CHAPS4%×20=×10-3×20×10-3×=***电解质5μL/ml10μLPMSF10μL/ml2μLEDTA2μL/ml10μL亮肽素10μL/ml10μL抑肽素10μL/ml2水化液Ⅰ:(猪肉,外文MS2005年)20ml7Murea7×20×10-3×=×20×10-3×=%(w/v)CHAPS2%×20=%(w/v)%×20=%%×20=Ⅱ:(大弹涂鱼肝脏组织,中文生命科学仪器2009)20ml7Murea7×20×10-3×=×20×10-3×=%(w/v)CHAPS4%×20=×10-3×20×10-3×=%%×20=%%×20=Ⅲ:双向电泳实验指南50ml8Murea8×50×10-3×=24g4%CHAPS4%×50=%%×50=%%×50=(使用前加)50mMDTT50×10-3×50×10-3×=、样品制备:猪肉:50mg+1mlEB在Eppendorf管中,用RetschMM2agitator仪器4℃下匀浆1h。提取物在10000g,10℃下离心1h。收集上清液,测定浓度。大弹涂鱼肝脏组织:取出大弹涂鱼肝脏组织,放入加有液氮的陶瓷研钵中,研磨成粉末状;,震荡混匀,4℃静置2-3h,静置期间每半小时颠倒混匀一次。12000r/min离心40min,取上清液;再15000r/min离心60min,取上清液。三、上样量分析型:100ug总上样体积350ul,150ul样品,200ul水化液样品与胶条接触1小时后,