课题3　血红蛋白的提取和分离.ppt

血液血浆水分固体物质:血浆蛋白、无机盐、磷脂、葡萄糖等血细胞白细胞血小板红细胞(最多)血红蛋白(90%)两个α-肽链两个β一肽链四个亚铁红素基团血液有哪些成分?阅读思考:血液由______和________两部分组成。血细胞中________细胞数量最多,细胞的含量最高的化合物是_____________。该化合物是由_____________和____________构成的,其中每个亚基中都含有一个能与O2和CO2结合的___________基团。血浆血细胞红细胞血红蛋白2条α-肽链2条β-肽链亚铁血红素血液组成成分血红蛋白两个α-肽链两个β一肽链四个亚铁血红素基团每个肽链环绕一个亚铁血红素基团,此基团可携带一分子氧或一分子二氧化碳,血红蛋白因含有血红素而呈红色。血红蛋白的特点:1、样品处理3、纯化4、纯度鉴定2、粗分离SDS—聚丙烯酰***凝胶电泳鉴定血红蛋白纯度凝胶色谱法进行纯化(一)蛋白质提取和分离步骤(4)透析血红蛋白(1)洗涤红细胞(2)释放血红蛋白(3)分离血红蛋白样品处理、粗分离、:洗涤的目的是什么?洗涤过程:血液100mL3g柠檬酸钠低速短时间离心红细胞血浆吸出血浆红细胞5倍体积生理盐水缓慢搅拌10min重复洗涤3次,直至上清液没有黄色为什么?:释放血红蛋白过程中,在洗涤好的红细胞加入了哪些物质?为了加速释放过程,采取了什么措施?目的分析:蒸馏水的作用是______________________________。加入甲苯的作用是____________________________。充分搅拌的目的是____________________________。?1mL1mL1mL去除血红蛋白中的小分子杂质纯化--::教材图5-、凝胶色谱柱的制作:①取长40厘米,,两端磨平。②底塞的制作:打孔→挖出凹穴→安装移液管头部→覆盖尼龙网,再用100目尼龙纱包好,插到玻璃管的一端注意事项:玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面,否则难以铺实尼龙网,还会导致液体残留,蛋白质分离不彻底。③顶塞的制作:打孔→安装玻璃管。④组装:将上述三者按相应位置组装成一个整体。⑤安装其他附属结构。