CVB3+VP1与宿主蛋白MAT1相互作用研究（可编辑）.doc

CVB3VP1与宿主蛋白MAT1相互作用研究(可编辑)学位论文独创性声明学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得直昌太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名手写/全寸彰椿签字日期:?。多年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定,有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊光盘版电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表,并通过网络向社会公众提供信息服务。保密的学位论文在解密后适用本授权书导师签名手写学位论文作者签名手写/?日日己月/易月/签字日期:多年签字日期:。多年摘要摘要目的:进一步确证与宿主蛋白存在相互作用,研究与相互作用对活性的影响,为深入认识的分子致病机制奠定良好的基础。方法:.用的感染细胞,于相应细胞的蛋白裂解液中,,,采用免疫共沉淀技术检测与蛋白的表达;.感染细胞、、、及质粒..转染、细胞、后,收集各时间点细胞,采用免疫荧光双标技术,用一驴抗小鼠二抗红色荧光与鼠抗单抗的特异结合来显示在细胞中的定位,用驴抗山羊二抗绿色荧光与山羊抗的特异性结合来显示在细胞中的定位,用激光共聚焦显微镜观察与的亚细胞共定位现象;、、..转染细胞细胞、、、后,收集各时间点胞浆、胞核蛋白,采用表达量的变化:;技术检测其中、及、、后,提取细胞蛋白,.质粒..,采用免疫共沉淀技术分析复合物中的表达变化;、、..转染细胞细胞、、、后,收集各时间点胞浆、胞核蛋白,采用技术分析的表达变化。与结果:.在感染后的细胞蛋白中,,同时能被?共沉淀。这表明,病毒感染后的细胞内,与摘要可以发生相互作用;.在感染组及质粒..转染组中均观察到与在细胞浆中存在共定位现象,且病毒感染细胞后及,这种现象更为明显;.随着质粒..转染及感染时间的延长,细胞总蛋白中表达无明显变化趋势;与表达量逐渐下调,.随着质粒..转染时间的延长,复合物中的表达逐渐地下调;.随着质粒..转染及病毒感染时间的延长,胞核蛋白中的表达量逐渐下调。及?结论:.进一步确证了与宿主蛋白存在相互作用;.与的相互作用引起表达量下调以及对磷酸化功能下调,导致活性下降。关键词:柯萨奇病毒;;;『江西省自然科学基金江西省科技厅科技支撑计划年项目:;脚.:.、,脚?...,,,.,,.一?、??..,,.,,,,,,...,,,一脚.?.,,.一,,,,?.:.........?.:....:;;;目录目录第章引言?.柯萨奇病毒组型?.蛋白..?.材料?...细胞株、病毒株、质粒??一..抗体??一..主要试剂??一..主要仪器设备一..主要的溶液成分和试剂的配制??...方法....病毒扩增..病毒空斑实验..细胞培养...质粒瞬时转染....病毒感染..??.?.??.?.?.??.?.??.?.?.?.?.....免疫共沉淀?..激光共聚焦观察与宿主蛋白亚细胞共定位现象..探讨与相互作用对功能的影响第章结果...病毒空斑实验??..激光共聚焦观察与存在亚细胞共定位??...表达与相互作用对总蛋白中、及量的影响?一..与相互作用导致活性降低??....与的相互作用对功能的影响??综盔??.缩略词表缩略词表第章引言第章引言柯萨奇病毒,属于小病毒科肠道病毒属。年,由和首次从美国纽约卅柯萨奇镇的一例发热麻痹患儿粪便中分离得到【,后称之为组柯萨奇病毒,:随后于年由等分离出组柯萨奇病毒,【】。当时,两组病毒根据感染小鼠后的不同症状来进行区分:感染新生鼠肌细胞,引起广泛骨骼肌炎及弛缓性麻痹为组病毒:引起乳鼠心肌炎、无菌性脑炎等,甚至导致痉挛性麻痹的发生的为组病毒【。柯萨奇病毒共有个血清型,组个,组个,它是人类重要的病原体之一,可引起多种疾病,造成的感染轻重