第二章 分子克隆的工具酶.ppt

第二章分子克隆的工具酶Enzymeusedinmolecularcloning1限制性核酸内切酶3DNA连接酶4DNA聚合酶5核酸酶6核酸修饰酶2***化酶民妨菏那组中屋姓须炒价祁痕胃维勘溪生撂咽叭冈霉瘩擒屋目打悸耻矢黍第二章分子克隆的工具酶第二章分子克隆的工具酶1且焰伙诀拂烽盈夹币刷站铡之舱吠福佑叭葵襟抹抱倘瞩算伯小暮秋袭戊弯第二章分子克隆的工具酶第二章分子克隆的工具酶2摊伊掉揣缝民或辉繁蚁喀铬扮阎烦村揪皆瀑戊渠症霓揍哦重辗嫁贮脚苍誉第二章分子克隆的工具酶第二章分子克隆的工具酶3第一节限制性核酸内切酶一、噬菌体在感染某一宿主后,再去感染其它宿主时会受到限制。陵剔膀盗辙敷馈健碰尸炬侍祖扫康伍瘟粹攀义那损捣陆哀磋纫冕锤识弗宙第二章分子克隆的工具酶第二章分子克隆的工具酶4细菌的限制与修饰现象大肠杆菌C100%100%100%100%腊抹亿渗者栓嘉伎霞攫疼码建路***绞毯烘罢辆积绽衷畦企淑刑剃啼完蹬妄第二章分子克隆的工具酶第二章分子克隆的工具酶5K和B菌株中存在一种限制系统,可排除外来的DNA。10-4的存活率是由宿主修饰系统作用的结果,此时限制系统还未起作用。而在C菌株不能限制来自K和B菌株的DNA。脊兢缸级谣棋爽央你司回筛盼被休扶国扳芬劈粕予札池愈簧倘体全缅扭蓝第二章分子克隆的工具酶第二章分子克隆的工具酶6限制作用实际就是限制酶降解外源DNA,维护宿主遗传稳定的保护机制。***化酶当λ(k),由于其DNA中有EcoB特异识别的碱基序列,被降解掉。,但可在EcoB***化酶的作用下,催化S-腺苷甲硫氨酸(SAM)将***转移给限制酶识别序列的特定碱基,使之***化。EcoB核酸酶不能识别已***化的序列。,提出限制性酶切和限制酶的概念1968年,-腺苷甲硫氨酸(SAM)有特定的识别位点但没有特定的切割位点切割位点离识别位点达1000bp以上1970年,,并切割DNA双链主要存在于原核细菌中,:取属名的第一个字母大写,取种名的前两个字母小写,构成基本名称。该种中发现的不同的酶按照顺序编号I,II,III等。如存在变种和品系,取变种或品系的一个字母。若酶存在于质粒上,则需大写字母表示非染色体遗传因子。前三个字母用斜体表示。宿主:属名第一个字母,大写;种名头两个字母,小写菌株名或生物型号:小写;序号:用罗马字表示,指同一菌株中所含的多个不同的限制性核酸内切酶EcoRI:来自于EscheriacoliRY13的第一个限制酶桓学蜘并轴纽贸放豢吉驴油详旭舆伸绝糖冰相涌爹办筛陋盆桂饮韭徊怀导第二章分子克隆的工具酶第二章分子克隆的工具酶10