中药活性指标成分阿克苷制备与鉴定.doc

附件1中药活性指标成分阿克苷(Acteoside)的制备与鉴定何江1,胡小鹏2,邱榕珠3,马文杰3,李涛2深圳大学医学院深圳大学生命科学学院深圳大学化学与化工学院摘要:本实验以苦丁茶木犀科植物紫茎女贞(Ligustrumpurpurascens)叶为原料,通过高效快速的分离纯化方法,制备得到目标化合物。目标化合物经结构鉴定为阿克苷(acteoside)。关键词:阿克苷紫茎女贞制备鉴定概述阿克苷(Acteoside),又名洋丁香酚苷(《中华本草》)、洋丁香苷(《中药辞海》)、毛蕊花苷、马鞭草苷、麦角甾苷等。1963年罗马大学,(acteoside)[1]。根据现有的文献查询分析,阿克苷广泛分布于双子叶植物中,含阿克苷的植物包括:唇阿克苷(acteoside)分子结构形科(Labiatae)15属41种,紫薇科(Bignoniaceae)4属5种,木犀科(Oleaceae)7属12种,列当科(Orobanchaceae)5属10种,玄参科(Scrophulariaceae)21属34种,马钱科(Loganiaceae)2属7种,马鞭草科(Verbenaceae)12属31种,车前科(Plantaginaceae)2属7种,爵床科(Acanthaceae)2属3种,木兰科(Magnoliaceae)1属2种,苦槛蓝科(Myoporaceae)1属1种,蓼科(Polygonaceae)1属1属,positae)1属1种,胡麻科(Pedaliaceae)1属1种,桔梗科(Campanulaceae)1属1种,胡椒科(Piperaceae)1属1种,苦苣苔科(Gesneriaceae)1属1种,蔷薇科(Rosaceae)1属1种,共计79属160种植物。现代药理研究表明阿克苷具有多种生理活性:抗氧化,抗病毒,保肝,抗肿瘤转移,抗炎,降血脂,抗菌,神经保护,降血压和心血管保护等[2]。由于阿克苷具有多种生理活性,且分布广泛,资源丰富,因此对其药用价值的研究已成为天然药物研发的新热点。阿克苷属新一类天然活性结构分子,随着药理研究的不断深入,必将为其带来广泛的临床应用前景。阿克苷为苯丙素苷类成分,可溶于醇类有机溶剂,溶于水,极性大,阿克苷分子结构对热和光不稳定,分离纯化难度大。探索高效快速制备和鉴定的方法,有益于阿克苷的药物研究和开发。实验部分一、实验仪器及试剂比旋度J―20C旋光光谱仪测定,紫外光谱用UV―210A型紫外光谱仪测定,红外光谱用IR―450型红外光谱仪测定,核磁共振谱用WH―400型核磁共振仪测定,FAB―MS用JAB―HS测定。层析柱材料用硅胶,D101大孔吸附树脂,SephadexLH-20。薄层层析用高效硅胶G板(HPTLC,silicagel,Merck),展开剂为CHCl3―MeOH―H2O(7:3:)。有机溶剂用甲醇,乙醇和***仿等。二、(Ligustrumpurpurascens)叶,剪碎,放入10L加热回流提取磨口器皿中,加入5LMeOH,加热回流2小时后,静置放凉,然后过滤,得提取液H1;随后,再重复操作一次,得提取液H2(提取流程见图1)。合并两次提取液H1和H2,并减压浓缩,。,充分搅拌混匀,然后静置一小时,滤出上清液,如此反复操作三次,将所得的上清液合并,并直接上D101树脂(1500g)层析柱分离。D101树脂层析柱分别用纯净水、50%甲醇和甲醇洗脱,得到三组馏分:A(),B()和C()。所得A、B、C三部分,经TLC检测[硅胶G,展开系统CHCl3―MeOH―H2O(7:3:)],B部分含有阿克苷。B部分()经硅胶层析,干柱切割法,得到三部分:E()、F()和G()。将含有阿克苷的F部分进行硅胶柱层析,以CHCl3―MeOH―H2O溶剂系统洗脱得到7组馏分(如图1所示)。其中F3部分()再进行一次硅胶柱层析分离,。粗品M再经SephadexLH-。图1阿克苷提取及分离纯化三、纯度检测经色谱层析纯化得到的M(),其纯度进行高效液相(HPLC)检测。检测条件为::安捷伦1200(Agilent1200)::C-18column(HypersilODS,250´):4℃:1ml/:1mg/::起始洗脱比例为H2O―acetonitrile(80:20,v/