CrⅥ对大鼠离体肝细胞线粒体呼吸功能的影响.pdf

硕士学位论文中文摘要Cr(VI)对大鼠离体肝细胞线粒体呼吸功能的影响摘要目的:探讨Cr(VI)对大鼠离体肝细胞线粒体呼吸功能的影响及NAC在cr(VI)诱导线粒体呼吸功能障碍中的保护作用。方法:将大鼠离体肝细胞线粒体随机分为8组,即空白对照组、NAC对照组、ROT对照组、ROT神寸AC对照组、cr(VI)处理组、NAC+Cr(VI)处理组、ROT+Cr(VI)处理组、NAC+ROT+Cr(VI)处理组。在体外试验系统,使用线粒体呼吸链酶复合体I抑制剂鱼藤***(RoT)(10pmol/L)(NAC)(1mmol/L)预处理大鼠离体肝细胞线粒体30分钟,加入受试物Cr(VI)(50$tmol/L)继续处理30分钟后,观察反映线粒体功能损伤的各项指标。经不同处理后的线粒体分别用荧光分光光度计检测线粒体中ROS生成、PTP开放度、跨膜电位(△、l,m),紫外可见光分光光度计检测线粒体呼吸链酶复合体I—V活性,Clark氧电极检测线粒体呼吸耗氧量,用PCR基因扩增技术检测mtDNA基因突变。结果:(VI)对ROS生成的影响:与对照组相比,各Cr(VI)处理组中ROS的生成增多,且有统计学差异伊<)。与单独Cr(Vi)处理组相比,NAC+Cr(VI)处理组的生成有显著性下降(P<),而ROT+Cr(VI)处理组和ROT+NAC+Cr(VI)处理组的ROS生成有显著性上升口<)。(VI)对PTP开放度的影响:与对照组相比,cr(VI)处理组的PTP开放度增加,差异有显著性(P<)。与单独cr(VI)处理组相比,NAC+Cr(VI)处理组的PTP开放程度有所下降,而ROT预处理后的cr(VI)处理组开放程度上升。(VI)对线粒体跨膜电位(Arm)的影响:各Cr(VI)处理组与对照组相比,线粒体跨膜电位(△岬)降低引起的荧光值上升具有显著性(P<)。经NAC预处理的Cr(VI)处理中荧光值的上升幅度相对于单独Cr(VI)处理中的要小,而经ROT预处理的cr(V1)处理组中荧光值上升的幅度最大。(V1)对线粒体呼吸链酶复合体I.Ⅳ活性的影响:各Cr(VI)处理组与对照组相比,线粒体呼吸链酶复合体I.Ⅳ活性下降具有统计学意义(P<):Cr(VI)单独处理组较空白对照,复合体I.Ⅳ%、%、%%;相较于ROT对照组,ROT+Cr(VI)处理组中复合体I.Ⅳ%、40%、%%:NAC+Cr(VI)处理组复合体II.Ⅳ活性较cr(V1)处理组分别上升5%、%%。(V1)对呼吸链酶复合体V(ATP酶)活性的影响:Cr(VI)处理后的线粒体Na+K+.ATPase、Ca2+.ATPase的活力及两者之和,与对照组相比,活力下降具有统计学意义(P<)。与Cr(VI)单独处理组相比,NAC+Cr(VI)处理组三者都有显著性上升,而ROT+Cr(VI)处理组三者都有显著性下降。NAC+ROT+Cr(VI)处理组中,三者的活性在ROT+Cr(V[)处理组和NAC+Cr(VI)处理组之间。(V1)对线粒体呼吸耗氧量的影响:与对照组相比,各Cr(VI)处理组ST3、ST4和RCR均有明显下降(P<)。与单独Cr(VI)处理组相比,NAC预处理后的cr(VI)处理组三者都有所回升(P<),而ROT预处理后的cr(V1)处理组ST3、ST4和RCR下降更为明显p<)。(Ⅵ)对mtDNA的影响:ROT和Cr(VI)联合作用导致线粒体ATPase6基因的3处突变,经NAC处理后,两者引起的突变消失。结论:cr(V1)可诱导ROS产生引起线粒体的氧化损伤;导致线粒体跨膜电位的下降甚至消失,使线粒体膜的功能发生障碍;,呼吸耗氧量下降,,从而引起线粒体呼吸功能的障碍。线粒体酶复合体I抑制剂ROT可加重cr(VI)对线粒体呼吸功能的损伤,两者作用引起mtDNAATPase6基因突变,NAC可通过清除ROS而减轻线粒体损伤,改善cr(V1)对线粒体功能的损伤,抑制ROT和Cr(V1)r31起的mtDNAATPase6基因突变。NrAC关键词:cr(VI),大鼠离体肝细胞,线粒体,呼吸功能,ROS,硕士学位论文英文摘要EffectsofCr(VI)onRespiratoryFunctionofMitochondriaInIsolatedRatHepatocyteABSTRACTObjective:ToexploretheeffectsofCr(VI)onr