糖耐量异常患者ApoE基因型频率分布及其与血脂水平关系的研究.doc

糖耐量异常患者ApoE基因型频率分布及其 与血脂水平关系的研究        载脂蛋白E(apolipoproteinE,ApoE)调控含ApoB的脂蛋白代谢,在动脉粥样硬化的发生与发展中起重要作用[1]。ApoE结构基因位点上存在3个常见的共显性等位基因ε2、ε3和ε4,可产生6种不同的基因型ε2/2、ε4/2、ε3/2、ε3/3、ε4/3和ε4/4[1]。最近,国外研究[2,3]表明,Ⅰ型糖尿病(IDDM),Ⅱ型糖尿病(NIDDM)人群ApoE基因型频率分布与正常人群相似,并且ApoE基因型对血脂水平有影响。我们对糖耐量异常(IGT)患者ApoE基因型频率分布及其与血脂水平的关系进行了初步研究,现报道如下。1 对象从武汉地区随机选择IGT患者(空腹血糖<,~)88例(男46例、女42例);年龄59±8岁。NIDDM患者200例(男103例、女97例),年龄58±10岁。所有患者甲状腺功能正常,无1例有原发性高脂血症及非糖尿病肾病史。正常健康人63例(男33例、女30例),年龄57±9岁。NIDDM诊断符合WHO标准。 方法(1)血脂、血糖测定:禁食12小时后次晨抽静脉血,EDTA抗凝及非抗凝血各1管,新鲜标本分离血清后经不同的前处理分别上机测定TC、TG、HDL-C、LDLC(酶法),血糖(葡萄糖氧化酶法)(7170A型全自动生化分析仪,试剂盒由北京中生公司提供)。(2)ApoE基因型检测:漱口水模板DNA制备按文献[4]报道进行;PCR扩增按文献[5]报道,采用扩增不应突变系统(amplificationrefractorymutationsystem,ARMs),设计ARMS引物如下:CGGCTGGGCGCGGA-CATGGAGGACGTTC3′ CGGC-TGGGCGCGGACATGGAGGACGTTT3′c85′T-GCAGAATT3′ a85′GCGAT-TGCAGAATC3′c5′TG-G-GCC3′(公共引物)。反应体系(50μl):各管加双蒸水35μl;10×buffer5μl(上海复华公司提供,随TaqDNA聚合酶供应);引物C和其它4种引物之一各1μl(25pmol/L,C分别与c2、a2、c8、a8配对);4×dNTP4μl();模板DNA3μl。覆盖液状石蜡油50μl。置扩增仪(pINC)中预变性96℃5分钟,50℃退火1分钟。取出在冰浴上加TaqDNA聚合酶1μl(2U/μl),10000r/min离心20秒,然后按70℃延伸1分钟,94℃变性1分钟,59℃退火1分钟,循环35次,最后经70℃延伸10分钟。产物经2%琼脂糖疑胶电泳,溴化乙锭染色,紫外灯下观察结果(附)。基因型判别按文献[5]的方法进行。 统计方法等位基因频率采用基因计数法。计数资料比较采用χ2检验。计量资料比较采用方差分析。因ε2与ε4对血脂作用相反,且ε4/2频率甚低,故统计时将其忽略不计。