Biacore SPR原理.pdf

Biacore基础课程乊一表面等离子共振(SPR)技术与Biacore原理通用电气公司生命科学部任薇薇**********/@课程目标•Biacore技术原理–表面等离子共振(SurfacePlasmonResonance,SPR)–传感图–Biacore提供的分子相互作用的信息•Biacore设备核心组件–SPR检测器–微流控系统(IFC)–传感芯片•Biacore分析的基本流程–固定–进样–再生BiacoreTMT200Biacore技术原理3January2012Biacore:实时、无标记、活性分子互作分析结合解离Biacore实时监控分子相互结合、解离的过程表面等离子共振原理(SPR)能量入射光源反射光能量检测器角度SPR角度棱镜50nm金膜时间样品微流路液相系统表面等离子共振原理(SPR)表面等离子共振原理(SPR)•SPR是一种折光率传感器,其响应值反映了SPR角度的改变•响应信号依赖于芯片表面分子的浓度和温度•1RU的响应值大致上相当于芯片表面结合物质的浓度改变了1pg/mm2(蛋白结合与CM5芯片)传感图(ram)稳态/平衡(Steady-state/Equilibrium)响应单位:RU解离(Dissociation)结合(Association)动力学,亲和力再生(Regeneration)基线(Baseline)亲和力,浓度反复上样基线(Baseline)10Biacore提供的生物分子相互作用信息:•有无结合(YesorNo)•结合的特异性和选择性(Specificity)•两种分子的结合强度--亲和力(Affinity)•结合和解离的快慢和复合体的稳定性--动力学(ics)•功能复合体形成的参与者、协同者和组装顺序(Mechanism)•分子结合的温度与热力学特征(Thermodynamics)•目标分子活性含量的检测(Concentration)亲和力(Affinity,KD)弱结合中等强度强结合mMµMnM10-310-610-9•亲和素-生物素结合:10−14M•强的抗原-抗体结合:10−8~10−10M•DNA与蛋白的结合:10−8~10−10M•较弱的抗原-抗体结合:10−6~10-7M•酶与底物结合:10−4~10−10M•蛋白与小分子结合:10−3~10−6M