多花胡枝子基因组dna提取与rapd反应体系优化 cropped.doc

()文章编号:10072043520040320219205多花胡枝子基因组提取与反应体系优化DNARAPD12323张吉宇,袁庆华,张文淑,鲁挺(,兰州730020;),北京100094;,兰州730070摘要:以多花胡枝子干种子、萌发种子及开花期叶片三种材料提取基因组DNA,其中开花期叶片用CTAB法提取、干种子和萌发种子用法提取的均用于研究。结果表明,叶片基因组的扩增最佳反应体系是:SDSDNARAPDDNARAPD2+模板用量为75,×,,,,,反应总体积25;扩增反应程序:94?预变性3;94?变性30,36?退火30,uLTaqDNAuLminss72?延伸1,循环45次,72?延伸10。minmin关键词:草原学;多花胡枝子;提取;DNARAPD中图分类号:943;:QSAGenomicDNAExtractionandOptimizingRAPDProcedureofLespedezafloribunda12232,2,2,ZHANGJiyuYUANQinghuaZHANGWenshuLUTing(1.,CollegeofPastoralAgricultureScienceandTechnologyofLanzhouUniversityGansuGrasslandEcologicalResearch,730020;2.,,100094;InstituteLanzhouChinaInstituteofAnimalScienceCAASBeijingChina)3.,730070,GrasslandCollegeofGansuAgricultureUniversityLanzhouChinaAbstract:ARAPDanalysiswasstudiedwiththegenomicDNAextractionofLespedezafloribundafromitsleavesatthefloweringperiod,itsdriedseed,anditsgerminatingseedusingtheCTABmethodandtheSDS2+.75,,posedbyngtemplateDNAmmolLMg-1200,10׃,,,:hermalreactionprogramsuitablefortheRAPDanalysiswasdevisedasfollowingsaninitialdenaturation94?for3minutes;45cyclesof94?for30seconds,36?for30seconds,72?for1minute;andafinalexten272?10。tionatforminutesKeywords:Grasslandscience;Lespedezafloribunda;DNAextraction;RAPD由Williams等创立的随机扩增多态性DNA;同时,使用叶片获得的基因组DNA进行RAPD扩法(),简称增反应体系的优化,为进一步开展多花胡枝子RandomAmplifiedPolymorphicDNARAPDDNA1标记技术,已广泛应用于遗传标记研究。高质量的植分子水平上的研究奠定基础。物基因组提取是研究及其它基因组研究DNARAPD的基础。目前,国内外植物基因组的提取方法较DNA1材料与方法2,5多,并在植物的各种组织上获得成功。本试验用常)((见的十六烷基三***)二烷基硫酸钠法,对多花胡枝子开花期叶片、干种(材料为多花胡枝子Lespedezafloribunda子及萌发种子三种不同时期材料的总基因组进DNA)种子由中国农科院畜牧研究所牧草种质资源,Bunge的方,行提取旨在获得快速提取高质量基因组DNA课题组提供,是2001年采自北京八大处的野生种子。投稿日期:2003206212;修回日期:2003211224()基金项目:国家“十五”科技部基础性工作专项资助项目2001,2003年()作者简介:张吉宇19782,男,甘肃民乐人,硕士,主要从事牧草育种及草地生态研