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lipo2000转染操作步骤.doc

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Stealth™RNAiorsiRNATransfection以24孔板为例,其余规格的转染见表11中板,细胞密度为30-50%适宜。注意:根据转染后细胞检测时间长短决定细胞中板密度,如果转染后需要长时间后检测,则细胞中板密度适当降低,已避免细胞过度生长导致存活降低。2第二天(24-36小时后)每个孔转染方式如下:A将20pmolsiRNA溶于50ulOpti-mem无血清培养基中。B将1ullipo2000溶于50ulOpti-mem无血清培养基中,混匀室温放置5min。C将AB两管混合,放置20min。3转染期间,将24孔板培养基换成无血清培养基,每孔400ul。将C管mix加入24孔板对应孔中,4-6小时候换成有血清培养基。PlasmidDNATransfectionDNA(ug):lipo2000(ul)=1:2-3转染时细胞密度越高,转染效率,表达效率也越高,并且可以降低细胞毒性。1中板。贴壁细胞:-2X105cells/well,第二天待细胞密度达到90%以上时转染悬浮细胞:4-8X105cells/well,中板后随即转染。2转染。-mem无血清培养基中。B将2ullipo2000溶于50ulOpti-mem无血清培养基中,混匀室温放置5min。C将AB两管混合,放置20min。转染期间,将24孔板培养基换成无血清培养基,每孔400ul。将C管mix加入24孔板对应孔中,4-6小时候换成有血清培养基。*™2000RNALipofectamine™20001000-10000cell/well96-

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