拉氧头孢钠的细菌内毒素检测.doc

拉氧头孢钠的细菌内***检测摘要:目的:考察拉氧头孢钠细菌内***检查方法的可行性。方法:依据中华人民共和国药典(二部)2010年版附录ⅪE细菌内***检查法,确定拉氧头孢钠的有效稀释浓度和细菌内***检查限值。结果:拉氧头孢钠稀释为5mg/ml浓度时对细菌内***试验无,其细菌内***。可采用细菌内***检查法对本品进行质量控制。关键词:拉氧头孢钠;细菌内***;干扰试验;鲎试剂拉氧头孢钠是半合成的氧头孢烯类抗生素,抗菌性能与第三代头孢菌素相近,对多种革兰阴性菌有良好的抗菌作用。此外,由于该品的耐β-内酰***酶的性能强,微生物对该品很少发生耐药性。细菌内***试验利用鲎的变形细胞与微量内***产生凝聚反应的现象,来判断样品中细菌内***限量是否符合规定,具有简便、快速、灵敏度高、重现性好等优点。本文依据中华人民共和国药典(二部)2010年版附录ⅪE细菌内***检查法的要求,考察拉氧头孢钠细菌内***检查方法的可行性。 1材料与仪器 :湛江安度斯生物技术有限公司生产,,灵敏度:,批号:1105272;以上鲎试剂经山东睿鹰先锋制药有限公司微生物实验室复核,灵敏度符合规定,可用于细菌内***试验。细菌内***工作标准品:中国药品生物制品检定所,120EU/支,批号:201072。细菌内***检查用水:湛江安度斯生物技术有限公司生产,5ml/支,批号:1111280。 ,由山东睿鹰先锋制药有限公司生产,批号:201204106001、201204106002、201204106003。 (梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)、电热鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)、电热恒温水浴槽(上海精宏实验设备有限公司)、旋涡混合器(上海医科大学仪器厂)、温度计、试管架、封口膜、砂轮、75%酒精棉球、金属直镊、玻璃移液管嘴、微量可调移液器、小试管、剪子等。所用热稳定性器皿应在电热干燥箱250℃干烤60分钟以去除可能存在的外源性内***。 2方法与结果 ,为正式干扰试验提供依据。将供试品进行一系列倍数的稀释,但最大的稀释倍数不得超过MVD=CL/ (1)干扰预试验供试液的制备: 称取适量拉氧头孢钠样品置玻璃试管中,用细菌内***检查用水1ml溶解制成含拉氧头孢100mg/ml的供试品原液。按下式计算供试品最大有效稀释倍数MVD MVD=C*L/λ式中L为拉氧头孢钠细菌内***,C为供试品原液含拉氧头孢的浓度(mg/ml),λ为凝胶法中鲎试剂的灵敏度标示值(EU/ml) 将含拉氧头孢浓度为100mg/ml的供试品原液用细菌内***检查用水依次稀释制成5倍稀释液、10倍稀释液(即浓度为10mg/ml)、20倍稀释液(即浓度为5mg/ml)、40倍稀释液()、80倍稀释液()、160倍稀释液(). (2)细菌内***工作标准品的制备将细菌内***工作标准品开启后加入1ml细菌内***检查用水溶解,用封口膜封口,在旋涡混合器上混合15分钟制成120EU/ml的内***标准溶液。将标准溶液依次稀释制成4λ(