酵母蔗糖酶的分离提取+(修复的).doc

酵母蔗糖酶的分离提取摘要:介绍了从酵母菌中提取蔗糖酶的过程和方法。利用有机溶剂自溶法、质量分数50%乙醇分级和透析的方法纯化蔗糖酶,测得蔗糖酶的总活力和蛋白质含量均逐渐下降。关键词:酵母、蔗糖酶、提取、纯化Abstract:,precipitatationwith50%ethylalcoholanddialyzing。:yeast;invertase;extraction;purification蔗糖酶(invertase)(β-D-呋喃果糖苷水解酶)(fructofuranosidefructohydrolase)(),又称转化酶,特异地催化非还原糖中的β-D-呋喃果糖苷键水解,具有相对专一性。不仅能催化蔗糖水解生成D-葡萄糖和D-果糖,也能催化棉子糖水解,生成密二糖和果糖。由于果糖甜度高,-,在工业上具有较高的经济效益,蔗糖酶的最适温度为45℃~50℃,~)酵母粉(实验室提供)2)醋酸钠()3)乙酸乙酯(8ml)4)10%醋酸5)无水乙醇6)蒸馏水7)3,5-二***水杨酸试剂(DNS)8)考马斯亮蓝G-5209)5%蔗糖10)NaOH溶液11)系列标准蛋白液12)9%生理盐水13)蛋白质染色液14)磷酸缓冲液buffer( )注:整个实验应避免高温,以防止酶失活(水浴温35℃))量筒25ml2)烧杯100ml、500ml3)大小试管若干4)吸耳球、玻棒、胶头滴管、PH试纸、各种滴定管5)恒温水浴锅、冰水浴锅6)秒表7)离心管、离心机8)分光光度计9)冰箱10)透析袋11))自溶法 将5g酵母粉倒入500mL烧杯中、少量多次地加入15mL蒸馏水,搅拌均匀,、8mL乙酸乙酯,搅匀,盖好,于35℃恒温水浴中搅拌30min。2)抽提 补加蒸馏水10mL,搅匀,盖好,于35℃恒温过夜,4000r/min离心10min,弃沉淀,得E1;量体积V1=,取出2mL置于4℃冰箱保存,待测酶活力及蛋白质浓度(留样1)。3)乙醇分级和透析测E1PH:用10%(注意少量、慢加、搅匀,防止调过),%HAc;第一次乙醇分级(30%乙醇饱和度):计算出使E1得乙醇浓度达30%,将E1和乙醇X1,放入冰浴中预冷,在不断搅拌下缓慢滴加乙醇,4000r/min离心10min,弃沉淀,留上清,得E2;量体积V2=(留样2);第二次乙醇分级(50%乙醇饱和度)同上法加入X2(为达50%乙醇饱和度时需要补加的无水乙醇的体积),。4000r/min离心10min,弃上清,沉淀立即用10ml/150m