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中山大学
硕士学位论文
马氏珠母贝功能蛋白的分离纯化及其cDNA克隆与重组表达
姓名:张小倩
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:徐增富
20060501
马氏珠母贝功能蛋白的分离纯化及其克隆和重组表达专业:生物化学与分子生物学硕士生:张小倩导师:徐增富教授摘要和遣糠挚扇艿模直鸾辛饲缀筒阄龃炕=徊嚼么炕娜马氏珠母贝騝具有两片贝壳,贝壳从外到内分为三层:贝壳从外到内分为三层:壳皮层、棱柱层和珍珠层Q芯糠⑾终渲椴阒泻懈髦指餮墓δ艿鞍祝纯堑男纬墒钦庑┑白共同作用的结果。本研究用乙酸脱钙的方法提取了珍珠层蛋白,发现提取的珍珠层粗蛋白热不稳定,在娣攀保恍┓肿恿拷洗蟮牡鞍追⑸到狻1狙芯分离了三个蛋白的分子量分别约为牡鞍字剩嘤Φ命名为琋和>璑一端氨基酸序列测定,确定褪且驯ǖ赖目溶性珍珠层蛋白>璏狹ǚ治觯范∟和莕的降解产物,是两个新的珍珠层蛋白。本研究还克隆了蚽的序列,并分别将它们同时克隆进和泶镌靥澹诖蟪Ω司甤中进行了重组表达,得到四种融合蛋白琀—珿和畁。其中甆合蛋白进行了体外碳酸钙结晶实验,发现这两个融合蛋白都具有抑制碳酸钙晶体形成的作用,是碳酸钙结晶过程的负调控因子。关键词:壳皮层,棱柱层,珍珠层,珍珠层蛋白,碳酸钙结晶,蛋白质聚合体融合蛋白,负调控因子
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图目录图马氏珠母贝珍珠层蛋白的阴离子交换层析肌图离子交换层析样品的狿治觥图珍珠层蛋白疏水层析图⋯..⋯⋯⋯⋯一图疏水层析样品的甈治觥图电沈脱样品的甈治觥图蛋白转膜⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯图—鉴定的亩卧趎氨基酸序列中的分布⋯⋯.法蛋白含量测定标准曲线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯.⋯ǖ鞍缀坎舛ū曜记摺图甃马氏珠母贝外套膜总缬炯觳狻图克隆鞍譪ǔけ嗦肭囊锷杓剖疽馔肌图克隆腸ǔさ腞峁觳狻图质粒盖屑ā图克隆的序列与己知的蛄械谋榷浴图克隆鞍譪ǔけ嗦肭囊锷杓剖疽馔肌图克隆腸ǔさ腞峁觳狻图质粒盖屑ā图克隆的序列与已知的序列的比对⋯图寺蛋白编码区的引物设汁示意图⋯⋯⋯⋯⋯.图寺编码序列的峁觳狻图柿酶切鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯...⋯.图用盖形坏愫驪产物与克隆的序列的比对⋯⋯.图刈橹柿酶切鉴定⋯⋯.⋯一⋯⋯⋯....⋯........
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如小俑原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其它个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要