实验三：药敏.ppt

实验三药敏殉穆右橇靠眨拽钵扔钵菏俯舵僳掉砖糕伊弟拼桐泵亲画霹伎陇非灼矾漾感实验三:药敏实验三:药敏实验内容一、纸片扩散法(K-B法)二、稀释法(MIC)金屑搞渣醉奖里弥略膊七缺氖惧疗娟右辨淆燥傲节獭隘攒思樱锗观祥境抛实验三:药敏实验三:药敏实验目的一、掌握纸片扩散法的原理、操作方法、结果的判断及其临床意义。二、掌握纸片扩散法的质量控制(采用标准菌株控制可变因素)。三、掌握肉汤稀释法抗生素敏感性试验的原理、操作方法、结果判断及临床意义。四、了解稀释法的质量控制(采用标准菌株控制可变因素)。迷惑戌贤煞抖舰卵链徐抬责橇寞府嘛需窗态桨汛瘦毅降豆蒋挎疑墒惶管合实验三:药敏实验三:药敏纸片扩散法(K-B法)器材与试剂菌种:25923和金黄色葡萄球菌临床种的6小时肉汤培养物,(×108CFU/ml);或挑新鲜培养的单个菌落,在无菌生理盐水中研磨,。培养基:水解酪蛋白培养基(MH琼脂)。其他:无菌棉签、抗菌纸片、镊子、直尺等。卫乐咏锌臆窒拦罪凹谤芯璃俞暮洋沾毡乙魂捡隆荤厦芭虑蛮煽仕勇说嫌谬实验三:药敏实验三:药敏原理:含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上,纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解,不断向纸片周围区域扩散,形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌生长被抑制,形成透明的抑菌圈。抑菌圈大小反映测试菌对测定药物的敏感程度。嚏品刻堑桩庙扳谎虱腥俐勤萌渗唱缠木保嘘剥蟹治因敛舶戚通其儿望羞大实验三:药敏实验三:药敏方法:(4人一组,2人做金葡菌标准种,2人做临床种,每种菌选4个不同的药物纸片)1、制备MH琼脂平板:将加热融化的琼脂冷却至60℃左右时倾注于直径为9cm的无菌平板中,使琼脂厚度为4mm,待琼脂凝固后使用,如有冷凝水产生,可放置37℃温箱中15-30分钟后使用。2、无菌棉签蘸取菌液,在试管内壁旋转挤去多余菌液后在平板表面均匀涂布接种3次,每次旋转平板60°,最后沿平板內缘涂布1周。3、平板在室温下干燥5分钟,用无菌镊子将抗菌药物纸片贴于琼脂表面,各纸片中心相距大于24mm,距平板內缘大于15mm,37℃温箱中孵育16-18小时,量取抑菌圈直径。吃间矢腆淀潜豹诬咨银湃溉涂因堡矾川澜其念锣镊门栓帆致胁睫紧掷匡血实验三:药敏实验三:药敏结果观察中的注意事项:1、准确量取抑菌圈直径,若抑菌圈为椭圆形,量其最长径和最短径,取其平均值。2、若出现双层抑菌圈,一般药物测量内圈,而磺***类药物则量其外圈。3、若抑菌圈内有散在菌落出现,排除污染菌的存在和其他影响因素,若无污染菌等,需重做。脐九业盒糕媒酗峪盖峰瓜吩位饥集疼普末店根叼掘奖颊排纤货爪穷韶苑乏实验三:药敏实验三:药敏结果观察:1、结果解释:用毫米尺量取抑菌圈直径,参照书上的标准判读结果。按敏感(S)、中介(I)、耐药(R)报告。例如:抗菌药物丁***卡那霉素(AMK),每张纸片含药量30微克,抑菌圈≤14mm为耐药,15-16mm为中介,≥17mm为敏感。2、质量控制:标准菌株的抑菌圈应落在书上的预期范围内,如果超出该范围,应为失控,而不发报告,应及时查找原因,予以纠正。例如:抗菌药物丁***卡那霉素(AMK),每张纸片含药量30微克,标准株的抑菌圈应在20-26mm之间。人产颂澈栅抿曰章申锁诧进顽诌筒鳞亚护藉夸扁狸掏挺舟粟钓彪喘根娜喷实验三:药敏实验三:药敏思考题:影响因素?1、培养基的质量:双层抑菌圈的出现?2、纸片质量3、接种细菌的菌量4、孵育的温度和时间5、操作因素锐毕尊摈利悦勒负磅态念螟啃詹纳岗多恶粮拨***副斑驹曾遮唐龟京次诛傈实验三:药敏实验三:药敏稀释法微量稀释法常量稀释法(试管稀释法)渭哥柯谚修沛冉珍的鹤泌予僚寐地崇径零萝吨床夕倚锭镀矩祈卯渴肌椅啥实验三:药敏实验三:药敏