MS培养基配方.doc

MS培养基母液的配制:20×MS大量元素(1L):38gKNO3,33gNH4NO3,·2H2O,·7H2O,。200×MS微量元素(1L):,,·4H2O,·7H2O,·2H2O,·5H2O,·6H2O。200×MS维生素和氨基酸(1L):20g肌醇,,(VB6),***素(thiaminehydrochloride,VB1),。200×MS铁盐(1L):·7H2O,·2H2O,先溶于500mLddH2O,加热,,定容至1L。注意:配制大量元素母液时,为避免产生沉淀,要用纯度高的重蒸馏水溶解,药品采用分析纯。化学药品先以少量重蒸馏水充分溶解后然后混合,混合时需注意边搅拌边混合。CaCl2·2H2O要在最后单独加入,在溶解CaCl2·2H2O时,蒸馏水需加热沸腾,除去水中的CO2,以防沉淀。配制铁盐母液时,FeSO4和Na2-EDTA应分别加热溶解后混合,并置于磁力搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20-30min),,室温放置冷却后,再冷藏。使用上述配好的母液,按照稀释倍数,配制基础MS培养液:1×MS大量元素,1×MS微量元素,1×MS维生素和氨基酸,1×MS铁盐,蔗糖30g/L,,高温高压灭菌。。另MS基本培养基可用MurashigeandSkoogBasalSaltMixture(Sigma-Aldrich)快速配制。播种方法:将烟草种子在自然条件下进行浸种处理(无菌水中浸泡100h),自然晾干后依次用酒精(70%)和***(%)进行消毒处理,最后用无菌水洗涤3-5次,彻底清除残留于种子表面的***。将消毒后的种子在无菌条件下播于MS固体培养基上,放入(25±2)℃的光照培养箱中培养。培养30d后取样测定。配制培养液:、蒸糖30g,放入1000mL的搪瓷量杯中,再加入蒸馏水750mL,用电炉加热,边加热边用玻璃棒搅拌,直到液体呈半透明状。然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中,最后加蒸馏水定容至1000mL,,在加热琼脂、制备培养基的过程中,操作者千万不能离开,否则沸腾的琼脂外溢,就需要重新称量、制备。此外,如果没有搪瓷量杯,可用大烧杯代替。但要注意大烧杯底的外表面不能沾水,