蒋3卵巢上皮癌组织中.doc

1基因mRNA表达水平与患者化疗反应性和生存期的关系前言卵巢癌、宫颈癌和子宫内膜癌是妇产科最常见的三大恶性肿瘤,随着宫颈癌和子宫内膜癌的早期诊断和治疗已经取得了巨大的进步,卵巢癌已经成为严重威胁女性生命的恶性肿瘤,发现之时多已处于晚期,五年生存率一直在25%~30%徘徊[1-3]。以铂类药物为基础的化学治疗是卵巢癌除手术之外的主要辅助治疗手段,既可用于预防术后的复发,也可用于手术未能全部切除者,部分患者可获暂时缓解,甚至长期存活。然而有20%到30%的患者对一线化疗药物始终无反应,初治有反应的患者仍有部分会发生继发耐药。研究表明,铂类药物的耐药和核酸切除修复系统(nucleotideexcisionrepair,NER)密切相关,NER系统可以修复铂类化疗药所造成的DNA损伤,从而降低患者对化疗的敏感性[4-9]。切除修复交叉互补基因1(plementationgroup1,1)是NER系统中的一个关键基因,其表达量与肺癌、胃癌、前列腺癌患者的预后相关。1基因共10个外显子,可分别转录为两个剪接体,含10个外显子的全长剪接体mRNA(fulllength,FL),和缺失第VIII外显子(长72bp)的变异剪接体mRNA(alternativesplicing,AS)。本研究使用TaqMan实时荧光定量RT-1的变异剪接体的表达量,以期对此变异剪接的临床意义进行探讨。试验流程1材料与方法:我院自2000年1月至2006年12月所收治的原发性卵巢上皮癌患者,术前未接受化疗,术后经病理确诊。全部标本均经病理科医师切片确诊,病理科医生并不知道病人纳入与排除的情况,充分使用了盲法。术后至少接受3个疗程的以铂类为基础的化疗。术前均签署知情同意书,允许所切除卵巢组织保存于我院并被用于科学研究。排除标准:接受术前化疗者;卵巢非上皮性癌者;病例资料不完整者;切除卵巢组织未行保存或者保存不善以致无法提取RNA者;拒绝将切除组织用于科研者。符合以上纳入与排除标准者共计63例卵巢上皮癌患者纳入研究。:全部标本均经病理科医师切片确诊。组织学分级标准主要依据世界卫生组织(anization,WHO)1973年制定的卵巢组织学分类法进行组织学的分类和分级,并参照细胞分化程度分3级:①分化1级,为高度分化;②分化2级,为中度分化;③分化3级,为低度分化。卵巢恶性肿瘤的病理分级、分期根据国际妇产科联盟(FédérationInternationaledeGynécologieetd'Obstétrique,FIGO)2000年修订的临床分期标准来判断临床期别:卵巢恶性肿瘤的手术-病理分期FIGOTNM0原发肿瘤无法评价TX无原发肿瘤证据T0Ⅰ肿瘤局限于卵巢T1Ⅰa肿瘤局限于一侧卵巢,包膜完整,表面无肿瘤,T1a腹水或腹腔冲洗液中未查见恶性细胞。Ⅰb肿瘤局限于两侧卵巢,包膜完整,表面无肿瘤,T1b腹水或腹腔冲洗液中未查见恶性细胞。Ⅰc肿瘤局限于单侧或双侧卵巢,伴有以下任何一项者:T1c包膜破裂、卵巢表面有肿瘤、腹水或冲洗液中有恶性细胞。Ⅱ肿瘤累及一侧或双侧卵巢,伴盆腔内转移。T2Ⅱa肿瘤蔓延和/或转移到子宫和/或输卵管,T2a腹水或冲洗液中无恶性细胞。Ⅱb肿瘤蔓延到盆腔其它组织,腹水或冲洗液中无恶性细胞。T2bⅡcⅡa或Ⅱb病变,但腹水或冲洗液中查见恶性细胞。T2bⅢ肿瘤侵犯一侧或双侧卵巢,镜检证实盆腔外有腹膜转移T3和/或N1和/或区域淋巴结转移。Ⅲa镜检证实盆腔外腹膜转移超出盆腔外。T3aⅢb盆腔外腹膜大块转移灶最大径线≤2cmT3bⅢc盆腔外腹膜转移灶最大径线>2cm,T3c和/或N1和/或区域淋巴结转移Ⅳ远处转移(腹膜转移除外)M1注:肝包膜转移为T3/Ⅲ期,肝实质转移为M1/Ⅳ期。胸膜渗出液必须有阳性细胞才能分为M1/Ⅳ期。N0-无区域淋巴结转移,N1-区域淋巴结转移。M0-无远处转移,M1-远处转移(腹膜转移除外)。化疗效果判断标准:判断标准参照曾益新主编的《肿瘤学》第2版第410页,以临床检查,CA-125和影像学检查结果来判断,pleteremission,CR);肿瘤体积缩小超过50%且持续一个月以上为部分缓解(partialremission,PR);肿瘤体积增大超过50%或有新病灶的出现为进展(progressive,P);肿瘤体积变化不超过25%为稳定(Stable,S)。对化疗敏感的定义:完全缓解与部分缓解均为敏感,对化疗有反应。对化疗耐药的定义:进展与稳定均为耐药,对化疗无反应。随访:生存时间的计算方法为从接受治疗之初到随访结束或者死亡之时。经门诊随访或者电话和信件随访。超速低温离心机-------------德国西门子公司TGL-16C台式高速离心机---------上海安亭科学仪器厂Geldoc2000凝胶成像分析系统-----美