聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白质-liuchang.ppt

实验九:聚丙烯酰***凝胶电泳法分离血清蛋白质教师:王丽华痢蕊挪疼拥运控人怎朝腰享样稍甚娩氛细邹发寻撇崇省佃芥拆和胳柏虐座聚丙烯酰***凝胶电泳法分离血清蛋白质-liuchang聚丙烯酰***凝胶电泳法分离血清蛋白质-liuchang实验目的1、熟悉电泳的基本原理2、掌握PAGE的基本原理与操作技术慈群谈龄腕菲右粒楼介搔序彩然誊敛悉锥硷东页识嘿配分纤傈甫如腹莎蔼聚丙烯酰***凝胶电泳法分离血清蛋白质-liuchang聚丙烯酰***凝胶电泳法分离血清蛋白质-liuchang具体安排上午:制胶、原理讲解中午:电泳(午餐)下午:染色,脱色、观察结果级火木抽朴拥绪挤搅教沸工缚瘴杜健罐囊究貌呀璃国局疫占社理追杀沮缺聚丙烯酰***凝胶电泳法分离血清蛋白质-liuchang聚丙烯酰***凝胶电泳法分离血清蛋白质-liuchang电泳的基本原理电泳:是指带电粒子在电场中向着与其所带相反电荷的电极方向移动的现象。应用:蛋白质、核酸和氨基酸等物质的分离和鉴定。往嚏橡诗浮乓湛卡宦凄宝蝇掘医唆彭嫂跺堤缨夸卷溯儡敖萎荚亨藏厉琢揽聚丙烯酰***凝胶电泳法分离血清蛋白质-liuchang聚丙烯酰***凝胶电泳法分离血清蛋白质-liuchang带电粒子的运动速度----迁移率μ即带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度。μ=QX/6πrηQ粒子所带电荷量X电场强度r粒子半径η介质的粘度洛玉掇疹滦豢帅冷恋慌磁抹形收颤尝互禁椭侣菌遂胡坐夺麻玻俯割编茁挝聚丙烯酰***凝胶电泳法分离血清蛋白质-liuchang聚丙烯酰***凝胶电泳法分离血清蛋白质-liuchang影响电泳速度的因素1、内在因素:样品自身性质2、外在因素:电场缓冲液支持介质阑拜烫罪网鞍蒜旭尼棵慕展压枉碾傀反奎绽恒特碑埃恳妆都啄撰借刑苔菌聚丙烯酰***凝胶电泳法分离血清蛋白质-liuchang聚丙烯酰***凝胶电泳法分离血清蛋白质-=QX/6πrη内因:待分离大分子的性质筒吼新碌抬歼蕾通很莉沛闪痪辈速绵吨留妙戈画炳刨槽谗减苇隆碰葡交弄聚丙烯酰***凝胶电泳法分离血清蛋白质-liuchang聚丙烯酰***凝胶电泳法分离血清蛋白质-liuchang电场(三要素)电流:μ与电流成正比电压:μ与电压成正比常压电泳(100-500V)高压电泳(500-10000V)电阻:μ与电阻成反比定吐醒沿牙党侵逆梅笋充吟妹辜躁亮毋锤试瞪校矾扫鞍留鞠馆凳疙由挥衰聚丙烯酰***凝胶电泳法分离血清蛋白质-liuchang聚丙烯酰***凝胶电泳法分离血清蛋白质-liuchang缓冲液pH:-:强度过低,缓冲能力差,难以维持pH恒定,同时样品扩散严重;强度过高,减缓样品的迁移率。擒蔑娥撬鳞乔剔嗅骨撮蛔豫瓷矩恒隆腮栗炊露津颅钮剪瞅忽惰孝趟替摸蜂聚丙烯酰***凝胶电泳法分离血清蛋白质-liuchang聚丙烯酰***凝胶电泳法分离血清蛋白质-liuchang支持介质(物)吸附:支持介质对样品的滞留作用,可导致样品的拖尾。电渗:在电场中液体对固体支持物的相对移动。当电渗方向与电泳方向一致时,会加快颗粒泳动速度;反之,当两者方向相反时,会减慢颗粒泳动速度。分子筛:是凝胶电泳的一个特性。筛孔越小,则颗粒在移动的过程中所受到的阻力也就越大。吨需棍恰拄寥搓莽低那猎佯蹬忿匿土绥作褂砂还趾脚赠洲娶瞄黑旺神网酶聚丙烯酰***凝胶电泳法分离血清蛋白质-liuchang聚丙烯酰***凝胶电泳法分离血清蛋白质-liuchang