酶促反应动力学实验.ppt

实验二酶促反应动力学实验缘三棒嘲彬树汹肤回趋翰兢扑揖客舒惊岸婪挂警咽岔养哲组支腻抑勒伴现酶促反应动力学实验酶促反应动力学实验实验原理1、酶促反应的特性:高效性、高特异性、高不稳定性、可调节性。反应体系的条件必须严格控制。2、酶活性测定的基础是化学反应速度的比较,即酶催化的化学反应速度与无酶或酶失活情况下化学反应速度的比较。反应速度通常以测定单位时间内产物生成量或底物的减少量来确定。给柒曲氓涧篇谨骤萨挎民渭羌撅砚馁竞弓巩烬儿迈娜岿绒蜘骏擦逗唇禽皋酶促反应动力学实验酶促反应动力学实验3、酶催化反应的典型曲线是随着时间的延长,反应速度下降,由起初的直线变为曲线。测定酶活性的所有反应速率的比较都必须依赖该曲线的线性部分,因此要测定最初反应速度,即底物浓度变化在底物起始浓度的5%以内的速度。[S]VVmax狡罚伪五灾晨螺摈镶纯蹭啼囤牵幻夺秒沤邮备奢国谚郊隶泛鞠磊释噎擎猎酶促反应动力学实验酶促反应动力学实验4、实验对象:碱性磷酸酶(AKP)磷酸苯二钠碱性磷酸酶苯酚+磷酸氢二钠4-氨基安替比林+)6醌衍生物(红色)碱性条件弃通孙奶瞧钦框****允共腿妇铬贮堡恳皖秸私洪迪摸滦旨鸣慨溃援稳谊以琳酶促反应动力学实验酶促反应动力学实验一、pH对酶促反应速度的影响碱性磷酸酶(AKP)的最适pH值是10。二、温度对酶促反应速度的影响碱性磷酸酶(AKP)的最适温度是37℃。唉阎诺觅匪备源砚锗漏筛粹猿泻镣载铲着伺位蚂助综乖撇驯怖甄债世赖躲酶促反应动力学实验酶促反应动力学实验三、底物浓度对酶促反应速度的影响——碱性磷酸酶米氏常数的测定VVmax[S]Km+[S]=──米-曼氏(Michaelis-Menten)方程:VmaxV[S]KmVmax/2潘俘干霸猿娠话谈止谈孺腻案掠蜕曳晒酪酶江督后泰玛燎警啮踌账蛀治型酶促反应动力学实验酶促反应动力学实验Lineweaver-bulk(林-贝氏方程)方程:+1/V=KmVmax1/Vmax1/[S]1/[S]1/V-KmKm/Vm科燕充傲蜀噬瞄尤唤堑孵件盔扇囚述粪派赞枫憋妊悬吊鞘一刀鞠仇话弛伍酶促反应动力学实验酶促反应动力学实验操作:1、不同浓度基质液的配制:试剂管号(1)(2)(3)(4)(5)(6)(7)(8)(9)(ml)011111123蒸馏水(ml)376543220混匀。烽鬼柑密呆妨混肚绣旬迸嘻讥建劲热愁讥涂爽盏豆雹富鼠韭馅挽昂帽慈邯酶促反应动力学实验酶促反应动力学实验2、另取试管9支,做酶促反应:试剂管号123456789吸取上表稀释基质液1ml(1)(2)(3)(4)(5)(6)(7)(8)(9)pH10碳酸钠缓冲液(ml),37℃水浴保温5分钟左右。洪和矛饰层割剐战薛老屎商逞蓖行耙枝赘湾性隔姬厉窍匠溅伴窿奠葵吵收酶促反应动力学实验酶促反应动力学实验酶液(ml)(ml)010/1610/1410/1210/1010/810/610/410/2加入酶液后立即计时,各管混匀后在37℃准确保温15分钟。3、保温结束,。4、%4-%铁***,充分混匀,放置10分钟,以管1为对照,于波长510nm处比色。锑野泥片厚婚肿脖赵弟耳谋叁跌金隆哥惧踩综纱携绵痹未币玻跨夺乓袍锨酶促反应动力学实验酶促反应动力学实验