5.层析-1.ppt

生物分离工程第五章色谱技术(Chromatograph)--1本章内容概述生化分离常用色谱技术—凝胶过滤层析、亲和层析、离子交换层析、疏水层析高效液相色谱技术应用蛋白分离色谱技术应用井做茬汁布君阵漏寸婆坏逐凰盎桩灭胡***--1概述色谱技术的基本原理色谱分离的主体介质由互不相溶的流动相和固定相组成。色谱技术(又名层析技术)是利用混合物中各组分物理化学性质的差异(如吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等),使各组分在两相中的分布程度不同,从而使各组分以不同的速度移动而达到分离的目的。--1层析的发展1903年俄国植物学家Tswett发现用碳酸钙作吸附剂吸附植物色素后,以石油醚冲洗,得到黄色、绿色区带,并最先提出色谱概念1970s早期高效液相色谱法(HPLC)目前气相层析仪和HPLC与色谱、质谱以及计算机联用(气质、液质联用)。--1基本概念固定相:是层析的一个基质。它可以是固体物质(如吸附剂,凝胶,离子交换剂等),也可以是液体物质(如固定在纤维素上的溶液),这些基质能与待分离的化合物进行可逆的吸附,溶解,交换等作用。流动相:在层析过程中,推动固定相上待分离的物质朝着一个方向移动的液体、气体等。柱层析中一般称为洗脱剂,薄层层析时称为展层剂。--1层析的分类分类原则类型特征据溶质分子与固定相相互作用的机理不同吸附色谱离子交换色谱疏水作用层析金属螯合色谱共价作用色谱分配色谱凝胶过滤亲和色谱吸附力不同各物质与固定相之间的离子交换能力的不同各物质与固定相之间的疏水作用的强弱不同各物质与固定相上的金属离子的络合能力的不同巯基化合物的巯基与固定相表面的二硫键作用力不同各物质在两液相间的分配系数不同各物质的分子大小或形状不同利用生物大分子与各种配基的生物识别能力不同据固定相的形状不同柱层析纸层析薄层层析固定相装在玻璃、不锈钢或有机玻璃柱中固定相为以氢键与纤维素羟基结合的水固定相在玻璃平板上铺成薄层据流动相的物态不同气相色谱液相色谱超临界流体色谱流动相为气体流动相为液体流动相为超临界流体按操作方式不同迎头法(迎头分析)顶替法(置换展开)洗脱法将混合物溶液连续通过固定相,只有化学亲和力最弱的组分以纯粹状态最先流出,其它各组分都不能达到分离。利用一种化学亲和力比各被结合组分都强的物质(置换剂)来洗脱,从而将料液中所含溶质按其与固定相亲和力大小的不同从固定相上依次洗脱下来,适于大量处理稀溶液。将混合液尽量浓缩,使体积缩小,引入固定相的一端,然后用溶剂洗脱,洗脱溶剂可以是原来溶解混合物的溶剂,也可选用另外的溶剂。--1层析的特点优点:(l)分辨率高(2)应用范围广(3)设备简单,操作方便缺点:处理量小、操作周期长、不能连续操作,因此主要用于实验室,工业生产上主要应用于价格较高的生化产品。--1纸层析、薄层层析、柱层析纸层析法是分离鉴定蛋白质的氨基酸组成的重要工具薄层层析常用于筛选吸附层析的流动相,用量少,快速,----1柱层析系统的组成缓冲液管柱梯度混合器检测器记录器(数据输出)收集器(1)(2)泵(3)(4)(5)adaptorreservoir胶体装填凝胶A柱层析技术有各种各样,但柱层析系统的组成基本相似,一般由蠕动泵、色谱柱、检测器、--1