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武义县高中生物实验技能提升培训(二).doc


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武义县高中生物实验技能提升培训(二)武义县高中生物实验技能提升培训(二)组织单位:县教研室指导专家:蓝伟侦培训内容:几种植物染色体体核型分析蓝伟侦在作“染色体核型分析”讲座材料:表1紫景天和四种龙葵的性状比较种类果实颜色果实特征分布区紫景天黄果龙葵少花龙葵浙江龙葵苏联龙葵褐色黄绿色亮黑紫色黑色黑紫色果小,卵状椭圆形粒细小,白中稍带黄粒较小,白色稍泛绿粒较小,白色粒大,乳白色全国东北零星分布南方各省区浙江北部北方各省区紫景天、少花龙葵、浙江龙葵、黄果龙葵和苏联龙葵种子,由湖州师范学院张海洋教授提供,通过培养种子并获得相应的根尖。表2各稻种的染色体数、基因组及地理分布稻种名称Nameofspecies染色体数目Chromosomenumber基因组Genome分布Distribution栽培稻(.)非洲栽培稻()疣粒野生稻()全世界西非南亚、东南亚亚洲热带、亚热带、药用野生稻()宽叶野生稻()高杆野生稻()斑点野生稻()栽培稻×药用野生稻F1植株BC1植株(栽培稻回交)BC1植株(药用野生稻回交)药用野生稻单体附加系(MAAL8)AA+C澳大利亚热带拉丁美洲拉丁美洲非洲————材料由华南农业大学卢永根院士、武汉大学何光存教授和李刚博士提供。2主要的化学药品和试剂实验中用到的主要实验药品见表3。表3实验中主要的化学药品及试剂名称纯度来源乙醇冰醋酸盐酸溶液果胶酶纤维素酶硫酸铁铵***化钠颗粒柠檬酸钠甘油甲醇分析纯分析纯分析纯生物纯生物纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯杭州长征化学试剂有限公司杭州化学试剂有限公司无锡市晨阳化工有限公司Fluka公司上海伯奥生物科技有限公司湖州湖试化学试剂有限公司无锡市晨阳化工有限公司中国医药(集团)上海化工有限公司浙江杭州双林化工试剂厂杭州萧山化学试剂厂磷酸二氢钠磷酸二氢钾***化钾柠檬酸Giemsa粉PI(碘化丙啶)DAPI生物素化dUTP***化dUTP分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯生物纯生物纯生物纯生物纯无锡市晨阳化工有限公司上海统亚化工科技发展有限公司宁波市化学试剂厂国药集团化学试剂有限公司国药集团化学试剂有限公司Sigma公司Roche公司华美生物工程公司Roche公司3主要仪器与设备主要仪器与设备见表4。表4实验中用到的仪器与设备名称型号制造商或产地光照培养箱SPX-250B-G上海博讯实业有限公司医疗设备厂4℃与-20℃冰箱BCD-215K海尔集团恒温水浴箱HH-4金坛市杰瑞尔电器有限公司架盘药物天平HC-TP11--93杭州新华纸业有限公司干燥器--显微镜荧光显微镜XSP-2CAOLYMPUSBX61上海日本4主要试剂的配制⑴卡诺固定液:酒精:冰醋酸=3:1(体积比)混合,置4℃冰箱保存备用,作用是迅速杀死细胞,使之在形态上和内部结构上保持生活时的完整和真实状态,并且能将细胞在生活情况下不易观察清楚的结构清晰显现。⑵对二***苯饱和溶液:实验室提供,作用是对根尖进行预处理,改变细胞质的粘度,抑制和破坏纺锤丝的形成,促使染色体缩短和分散,有利于对有丝分裂中染色体的观察和计数。⑶1%盐酸溶液:实验室提供,调pH。⑷2%果胶酶和纤维素酶:将果胶酶与纤维素酶1:1混合,使分生组织细胞间的果胶质分解,细胞壁软化或部分分解,使细胞和染色体容易分散压平。⑸苏木精染液:实验室提供,使染色体染上较深的颜色,分色清晰,照像效果较好,利于标本长期保存。⑹硫酸铁铵:实验室提供,在进行苏木精染色前进行媒染,使苏木精染色效果更好。⑺2ⅹSSC:,,加入100mlddH2O,于烧杯中搅拌使***化钠,柠檬酸钠完全溶解,并混匀,置试剂瓶中保存。⑻Giemsa染液:,甘油22ml,将Giemsa粉置于研钵内先用少量甘油与之充分混合,研磨至无颗粒,然后将剩余的甘油混在一起,56℃保温2小时后,加入33ml纯甲醇,保存于棕色瓶内。⑼Sorense缓冲液:Na2HPO4(1/15M)50ml与KH2PO4(1/15M)50ml混匀,并测pH(pH=),作用在于平衡pH值。(1)插穗:选择当年萌发枝,剪成6~7厘米长,带顶芽,粗插穗(~)。①用光照培养箱培养:温度20℃,光照强度为2500lx(6时~19时),插床选用长方形72孔(6×12)黑色育苗盘,每个孔的长×宽×××5cm,进行生根培养。②室温培养:插床选用长方形72孔(6×12)黑色育苗盘,每个孔的长×宽

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