注射用重组人促红素（cho细胞）.doc

注射用重组人促红素(CHO细胞)注射用重组人促红素(CHO细胞)ZhusheyongChongzuRenCuhongsu(CHOXibao)binantHumanErythropoietinforInjection(CHOCell)本品系由高效表达人红细胞生成素(简称人促红素)基因的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,经细胞培养、分离和高度纯化后冻干制成。含适宜稳定剂,不含防腐剂和抗生素。1基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。2制造2(1工程细胞2(1(1名称及来源-重组人促红素工程细胞系由带有人促红素基因的重组质粒转染的CHO-dhfr(二氢叶酸还原酶基因缺陷型细胞)细胞系。2(1(2细胞库建立、传代及保存由原始细胞库的细胞传代,扩增后冻存于液氮中,作为主细胞库;从主细胞库的细胞传代,扩增后冻存于液氮中,作为工作细胞库。每次传代不超过批准的代次。细胞系冻存于液氮中,检定合格后方可用于生产。2(1(3主细胞库及工作细胞库细胞的检定应符合“生物制品生产用动物细胞基质制备及检定规程”规定。2(1(3(1外源因子检查细菌和真菌(附录XIIA)、支原体(附录XIIB)、病毒检查(附录XIIC)均应为阴性。2(1(3(2细胞鉴别试验应用同工酶分析、生物化学、免疫学、细胞学和遗传标记物等任一方法进行鉴别,应为典型CHO细胞。2(1(3(3人促红素表达量应不低于原始细胞库细胞表达量。(工作种子批可免做)目的基因核苷酸序列应与批准序列相符。2(2原液2(2(1细胞的复苏与扩增从工作细胞库来源的细胞复苏后,于含灭能小牛血清培养液中进行传代、扩增,供转瓶或细胞培养罐接种用。小牛血清的质量应符合规定(附录?ID)。2(2(2细胞培养液生产用细胞培养液应不含牛血清和任何抗生素。2(2(3细胞培养细胞培养全过程应严格按照无菌操作。细胞培养时间可根据细胞生长情况而定。2(2(4分离纯化收集的培养液采用经批准的超滤法或其他适宜方法进行浓缩,多步色谱纯化后制得高纯度的重组人促红素,即为人促红素原液。除菌过滤后保存于适宜温度,并规定其有效期。2(2(。,并用缓冲液稀释。除菌过滤后即为半成品。。“生物制品分批规程”规定。“生物制品分装和冻干规程”规定。半成品应及时分装、冷冻。冻干的全过程中,制品温度应不高于30?。。“生物制品包装规程”规定。-2mg/ml,作为供试品溶液。以4g/L碳酸氢铵溶液作为空白测定供试品溶液在320nm,325nm,330nm,340nm,345nm和350nm的吸光度。用读出的吸光度的对数与其对应波长的对数做直线回归,求得回归方程。照紫外-可见分光光度法(附录IIA),在波长276nm,280nm处,测定供试品溶液最大吸光度A,将A对应波长带入回maxmax归方程求得供试品溶液由于光散射产生的吸光度A。按下式计算,。光散射蛋白质含量(g/100ml)=(A-A)?×