PVDF转印膜在WB中的应用.pptx

PVDF转印膜在Western Blot中的应用Owen, 2014年8月PVDF转印膜的概念、特点、应用和市场竞争分析2聚偏二***乙烯(英文名称:polyvinylidenedifluoride,简称PVDF),主要是指偏***乙烯均聚物或者偏***乙烯与其他少量含***乙烯基单体的共聚物。聚偏二***乙烯分子结构聚偏二***乙烯(PVDF)作为一种新型***碳热塑型塑料,具有极好的耐气候性和化学稳定性,波长为20~400nm的紫外灯照射一年,其性能基本不变,室温下不受酸、碱等强氧化剂和卤素等腐蚀。鉴于以上优点,PVDF膜从80年代中期开始得到了大量的应用。聚偏二***乙烯(PVDF)是由millipore公司在1985年首创并应用于蛋白质转印。目前国外已经能够生产出各种性能优良的PVDF膜。国内的PVDF微滤和超滤膜也己形成了一定的生产规模,但是对于蛋白质转印方面的PVDF膜的生产几乎为零,而国际上目前也鲜有这方面的文献报道。4PVDF转印膜是疏水性膜,主要有两种孔径形式存在: μm PVDF转印膜:适用于低分子量蛋白(<20KD)、核酸(<300bp) μmPVDF转印膜:适用于高分子量蛋白(>20KD)、核酸(>300bp) PVDF PVDF 膜聚偏二***乙烯(PVDF)采用通过疏水键和正电荷与靶分子结合(1)机械强度高,耐腐蚀,保质期长(2)低背景,灵敏度高,优异的信噪比(3)对大范围的化学溶剂具有抵抗性(例如***、DMSO,二***甲先***等)(4)蛋白结合能力强。BSA>125μg/cm2,山羊IgG>125μg/cm2,胰岛素>125μg/cm2。(5)相容染色剂广:考马斯亮蓝染色剂、酰***黑、印度墨水、丽春红、胶体金、CPTS、甲苯***蓝、透射显影和Sypro?ruby等。(6)应用范围广:Western Blot、Northern Blot、Southern Blot、吸附分析、氨基酸分析、N 端蛋白质测序、Dot/Slot blotting、糖蛋白显色等。(7)适用多种显色方:化学发光、常规显色、同位素、标准染色、免疫荧光等。PVDF转印膜特点性能NC膜PVDF膜材料质地易脆机械强度高溶剂耐受性无有背景低低SDS存在下蛋白质结合80-100 μg/cm2125-300 μg/cm2操作程序缓冲液润湿,避免气泡使用前100%甲醇润湿检测方式常规染色,可用放射性和非放射性检测常规染色,比较于NC膜,可用考马斯亮蓝染色,可用于ECL检测,快速免疫检测。 PVDF膜在几乎所有性能方面都超越了传统NC膜,因此目前PVDF膜逐渐在取代NC膜成为主流蛋白质转印膜材料。Western Blot中PVDF膜与NC膜的选择由于PVDF膜与***纤维素膜相比有许多突出的优点,包括更好的蛋白质保留率、更高的机械强度和更广的化学相容性,因此被广泛使用于免疫检测实验当中。其中更高的机械强度和更优的化学相容性使PVDF膜成为免疫检测中染色和二次免疫检测时的理想选择。8-滤纸凝胶膜滤纸+原理:蛋白因结合SDS而带电荷,转膜即在电场作用下从胶中转至膜上的过程。PVDF转印膜在WB中的应用9湿转湿式成功率高并特别适合用于分子量大于100KD的蛋白半干式转膜速度快,适合与小分子量蛋白方法仪器特点转膜半干转