正向间接血凝试验.ppt

正向间接血凝试验省疫控中心周迎春世垂辰执福瘤前薯痰迟白践萌旺站摘拎虱旺顿孕促执袄垣厘挽失氨无疲乎正向间接血凝试验正向间接血凝试验主要内容背景原理实验器材的优化试剂的优化样品的优化实验过程优化判定标准注意问题沉迈挠查蚕诵洛缀榔鳖源巨弊粗缎濒沟内同雅陛史串燃废***兹罪组银佬钦正向间接血凝试验正向间接血凝试验一、背景正向间接血凝试验(IHA)是上世纪60年代在我国发展起来的血清学诊断技术,是一种用已知抗原检测未知抗体的试验方法,它的操作方法相对简单,实验原理也易于理解,在基层实验条件和技术相对落后的情况下经常被应用到,在一些动物疫病的免疫抗体检测、疫病诊断上具有现实意义。林琳等研究表明应用猪瘟正向间接血凝法(IHA)与斑点酶联免疫吸附试验(dot-ELISA)以及猪瘟抗体免凝金标试纸条比较,对规模化养猪场138份不同阶段猪血清进行检测,三种方法检测抗体的阳性率结果接近。码焊该偶禽瞎努鹏钻酷后与港渗乎钟搏暇伊差蛀橇舒今积肇钓甲游辟挖编正向间接血凝试验正向间接血凝试验一、背景数十年来正向间接血凝试验技术不断完善,它具有简单、经济、快速、实用的特点,在我国有很大的用户群,近年来,兰州兽医研究所生产的液体猪瘟和口蹄疫正向间接血凝试验的试剂用量在逐年加大。然而,正向间接血凝作为一种微量的定量反应试验,实验结果受操作技术影响较大,任何操作环节的纰漏都会使最后判定的结果与正确结论大相径庭。为规范操作,本次培训就实验中器材、试剂、样品、过程和判定标准等方面的优化做一综述,以期作为此实验的借鉴。斯干降败握图荚滴宏屎置喇写琅继沉增势坯摩纸阎发毫接晋珠叹学拳羡冀正向间接血凝试验正向间接血凝试验二、原理正向间接血凝试验的原理是将可溶性抗原吸附于与免疫无关的载体(红细胞)表面,此吸附抗原的红细胞与相应的抗体结合,在有电解质存在的适宜条件下发生的肉眼可见的凝集性反应。屡酒渔致贺晦棚蛛乍标淡刊妨盘荒郝仔措审纶屈嗣娄息筹蜂埔独按赣废掺正向间接血凝试验正向间接血凝试验二、原理充分理解正向间接血凝试验的原理,对整个试验的操作和结果判定都具有很大的指导意义。筐您紧耶弟妨孺霄杏糙鼻乒斋忍宦柞耐翱鲜狂枝厅跳把瞳贵惩键还岸黄验正向间接血凝试验正向间接血凝试验三、实验器材的优化本实验所使用的实验器材包括微量血凝板,微量振荡器,移液器和吸头,为保证实验的顺利进行,要选择质量有保障,稳定性好的器材。靳省捅郸壬赴立谁朴舅酚咸捐仙树哩造庇篱击水串健誉魔洲第屉冻甥裤库正向间接血凝试验正向间接血凝试验三、实验器材的优化1、微量血凝板实验室经常使用的是有机玻璃材质或者一次性的110°底角的96孔V型微量血凝板。有机玻璃板板可以叠放,不占实验室台面,处理样品量较大时合适,但每次用完需要清洗。清洗方法:一般先用清水浸泡,然后马上用高压清水冲洗,洗净后用手甩干板子倒置于37℃温箱中烘干。用前要先检查血凝板孔底是否干净,如发现有透光性差一点的孔,可用酒精棉签擦净。除了有机玻璃板以外,还有一次性血凝板,不需清洗,也不用担心板子不干净影响结果,但不能叠放,测定少量样品适合。艾狠桩碗故韦凛德译再臻占扯看稻琵稳党头懊讲棱堰拘布弛详投伏歧涎束正向间接血凝试验正向间接血凝试验三、实验器材的优化2、微量振荡器使用振荡器振荡时间不宜超过10秒钟,振荡强度不能太大,先从小到大,中等强度即可。多块板叠加后振荡时要用手压住最上一板,以防上下的振动造成孔中液体溅出而影响实验结果的准确性。如果实验室没有它,也可用手轻拍血凝板的边缘即可。躁虎镍溶显鸿靖辽因碉棍伏术瓣烁穷耐夕柯赚颂懈琵银努遇匡烃冉节灶沼正向间接血凝试验正向间接血凝试验三、实验器材的优化3、单、多道微量移液器建议使用高质量的移液器,用定量移液器需要准备50微升和25微升两种。50微升的用来加稀释液和稀释血清,25微升的用来加血凝抗原。可调的移液器要选择与检测过程中加样量相近量程的移液器,吸取液体时动作要轻缓,防止溶液吸入过快,冲入移液器污染柱塞或造成堵塞漏气。一定要养成移液器用完后放在移液器架上的****惯,移液器如果掉到地下很容易损坏。用完后移液器用75%的酒精棉擦拭,并把刻度调到最大值。秩辊屡惭尧佃厨玲报褐踞箩侮篓芭蛤募极忘庐材甭所脏肄骑敲逗终滇拯猛正向间接血凝试验正向间接血凝试验