细胞工程第五章-课件（PPT·精·选）.ppt

第四章细胞融合与单克隆抗体第一节细胞融合及其方法一、细胞融合(cell fusion)的定义又称体细胞杂交(somatic hybridization)或细胞杂交(cell hybridization),是指在离体条件下用人工方法将不同种生物或同种生物不同类型的单细胞通过无性方式融合成一个杂合细胞的技术。分为自发细胞融合和诱导细胞融合。(一)自发细胞融合(spontaneous cell fusion)指在未施加任何条件的情况下所发生的细胞融合现象。◆体内细胞的自发融合可以在受精过程、个体内的肌管形成、胚胎着床、巨细胞和破骨细胞的形成、肿瘤细胞的融合等过程中观察到。◆体外细胞的自发融合小鼠和鸡成肌细胞的融合:可在原代培养中观察到,只有处于G1期的成肌细胞才能彼此发生融合。肿瘤细胞的融合:体外培养的肿瘤细胞和体内一样彼此发生融合。(二)诱导细胞融合(induced cell fusion)指在人为诱导条件下所发生的细胞融合现象。人工诱导形成的融合细胞有两类:?同核体(homokaryon):由同一基因型亲本细胞融合而来。?异核体(heterokaryon):由不同基因型亲本细胞融合而来。生物法、物理法、化学法二、细胞融合的主要过程?细胞在诱导剂或正弦电场作用下凝聚,彼此靠近;?两个相邻细胞之间的质膜相互融合;质膜上的受体、糖蛋白等质膜成分在融合后的质膜上重新分布;?细胞质发生融合;?细胞核融合,形成融合细胞。细胞桥的形成:细胞膜磷脂分子扰动出现通道三、细胞融合技术细胞融合技术是研究细胞间遗传信息转移、基因在染色体的定位以及创造新细胞株的有效途径。细胞融合技术的主要过程:1、制备亲本细胞;2、诱导细胞融合;3、筛选杂合细胞。(一)亲本细胞的制备1、对于植物和微生物细胞的融合必需先制备原生质体。2、动物单细胞可以直接用于细胞融合。(二)诱导细胞融合◆1962年日本学者发现日本血凝性病毒引起艾氏腹水瘤细胞融合成多核细胞。◆20世纪70年代初,高国楠发现聚乙二醇(PEG)能促使植物原生质体融合。◆20世纪80年代,齐默曼等建立电场诱导细胞融合方法。细胞A细胞B杂交细胞生物法化学法物理法