PCR在HIV感染研究中的应用.doc

PCR在HIV感染研究中的应用.doc:..PCR在HIV感染研究中的应用• H1!ri简介HIV与PCR技术•主体内容一、 HIV的基因结构二、 PCR在鉴定HIV感染中的童义三、 HIV感染的定量PCR研究四、 PCR的相关问题五、 实例•结语•前言八I•年代以来山人类免疫缺陷病毒HIV(HumanImmunodeficiencyVirus)感染而引起的艾滋病(AIDS)I大1其严亜的危害性而受到人们高度巫视。HIV图二:HIV力争N期诊断和寻求仃效治疗是防止其广泛传播的关键所在。聚合酶链式反丿''、,(polymerasechainreaction,PGR)1985年,Mallis等根据核酸H然扩增理论,建立了一种人工体外DNA扩增技术,即聚合酶链式反应,并于1987年完成了自动化操作,极大地推动了分子生物学的发展,也为包括病再感染在内的临床疾病诊断提供了一种崭新的于-段。1、PCR的基本原理靶DNA分子变性后解链,两条单链DNA分别经复性与两条引物互补结合,在4种dNTP存在和合适的条件下,山DNA聚合酶催化引物山5'—>3'扩增延长,每经过变性、复性、延伸一个循环,模板DNA增加1倍,新合成的DNA链乂可作为下一个循环的模板,经过30〜50个循环,可使原DNA量增加106-109倍。2、 主要步骤PCR的每一循环包括变性、复性、延伸3个步骤,此外整个试验应包括DNA模板提取,如果模板为RNA,还需增加从RNA到DNA的逆转录过程。除模板提取外,这些操作均可在同一系统中完成,仅仅改变反应温度即可完成。3、 引物的设计4、 常用的PCR技术(定量PCR等)5、 PCR产物的分析(凝胶电泳等方法)PCR具冇敏感、特异和快速的特点,是检测艾滋病病毒、评价病情进展和探讨发病机理的有效工具。本文将就日前HIV与PCR研究的现状,谈谈PCR技术在HIV研究中的应用。一、HIV的基因结构HIV的基因结构与其它逆转录病毒基本相同,为RNA双分(,其单链RNA分了山9749个核廿酸组成,有3组共9个基因。第一纽为逆转录病毒共同的基因:gag、pol、envffi因,及侧現的长末端亜复顺序(LTR)等。:tat、rev、nef。第三组为特冇基因:vif、vpu、vprrrvCoreproteins\zymeiiLTRGAGENVInvclopcprotein%ENVHIVYrI-分高的遗传变异率,是一个多态性病痔。高度变异区在envffiw内,相当于gp120的五个区段,gag和pol基因较少变异。目前已知HIV彳j两个型:HIV,和HIV-2O因此,只有选择病毒基因组中高度保守区域作为目的基因加以扩增,才能有效地检测所有HIV的变异性。二、PCR在鉴定HIV感染中的意义HIV常可引起潜伏感染,但仍具冇传染性,整介的病零基因组在侮个细胞中仅以很低的DNA拷贝数存在,因此,需要建立一个敏感而乂特异的HIV检测方法。传统的HIV检测方法•病毒体外培养法•逆转录酶法•外周血液中核衣壳抗原宜接检测法•原位杂交法•Southern印迹法等等缺点:比较费时费力,稳定性、特界性、敏感性较低。PCR方法的优点:三、HIV感染的定量PCR研究对体内的病毒水平作准确的定量分析,冇助于对感染过程的齐期