动力学亲和力分析.ppt

动力学/亲和力分析基础知识介绍*什么是动力学和亲和力?动力学反应发生的速度?–与时间相关结合–分子间结合的速度解离–分子复合物解离的速度动力学分析能够确定在一个给定的时间跨度内,分子复合物是否能够结合还是完全解离亲和力分子间结合的强度?–与时间无关亲和力分析能够确定反应处于平衡状态(结合与解离形成动态平衡)时,复合物的浓度*动力学分析和亲和力分析的相关性?细胞本身就是一个动态系统–极少处在平衡状态同样的亲和力,不同的反应,动力学数据一般并不相同动力学数据提供了更多的信息*同样的亲和力,不同的动力学所有4个化合物的亲和力数据相同KD=10nM=10-8M结合动力学常数可有不同数量级范围内的改变,本例中为4个数量级kon koff(M-1s-1) (s-1)106 10-2105 10-3104 10-4103 10-5时间浓度=1000nM30min60min所有靶位点被占据Response时间30min60min浓度=100nM*用Biacore获得动力学和亲和力数据的3种方式监测结合和解离速率亲和力动力学监测稳态水平亲和力动力学监测溶液中游离的分析物分子亲和力动力学YesYesYesYesNoNo*1:1动力学模型的速率方程*平衡常数(Equilibriumconstants)*Biacore中的平衡和动力学A是溶液中的待分析物(analyte)A的游离浓度由流动系统控制,在检测中保持恒定AB是结合复合物AB的浓度可通过直接检测RU得到,表示为RB是偶联在传感芯片上的分子总浓度能用RU表示,相当于最大结合反应理论值RmaxB的游离浓度即Rmax-RA+BABkakd我们无需知道复合物和配体的实际浓度!*Biacore中的速率和亲和力*传感图中的变量和表示方式