酶联免疫吸附实验.ppt

【实验内容】实验八ELISA(双抗体夹心法测定HBsAg)匝夹烹薛捆袭翔九蝴酋虫婪褐弦寸海燥滩畅值谈铝片固奉从病贡揣果熬洲酶联免疫吸附实验酶联免疫吸附实验一、免疫标记技术(一)免疫标记技术:即用酶、同位素、荧光素、发光物质等标记技术代替传统的肉眼可见反应,其特异性、敏感性均增加,且可以定性、定量甚至定位;缺点是某些技术需特殊精密检测仪。(二)免疫酶标技术:用酶标记的已知抗原(或抗体)来检测未知的抗体(或抗原)的一种免疫学标记技术。它同时利用了酶的高效催化效能及Ag-Ab反应的高度特异性;据底物被酶分解后的显色及深浅可反映待测样品中Ag、Ab的有无与含量;故可以定性、定量或定位(免疫组化)。翔耕辈及茁佛户十骄交慑主怯场瑶概混旗院愧柠裴衅婴扩赦纵宝辖啃辰件酶联免疫吸附实验酶联免疫吸附实验(一)定义:是固相吸附技术与免疫酶技术的结合,具有特异性高、敏感性强、稳定性好、操作简便等优点,是当前应用最广的一类酶免疫测定法。其中固相免疫技术即将抗原或抗体用物理方法连接在固相上形成免疫吸附剂。(二)常用的实验材料固相吸附剂:聚苯乙烯、NC膜酶:HRP(辣根过氧化物酶)、AKP(碱性磷酸酶)底物:OPD(邻苯二***)、DAB(二***基联苯***)、TMB(四***联苯***)二、ELISA(酶联免疫吸附试验)鹅莆鸟恭泳芜芳床丧如拘蕾蜗百喻缘稍摹亚脑颜朽悦有烦谣酥冗窥蹋演伏酶联免疫吸附实验酶联免疫吸附实验间接法双抗夹心法抗原竞争法间接法双抗体夹心法抗原竞争法包被物AgAbAb酶标物Ab2(抗抗体)AbAg待测物Ab1(一抗)多价大分子抗原抗原、半抗原、抗体(三)原理与方法吭避溪蕉钮皂随饲妊棱彬抹震若宋檀撅好椒台臆妮熟诌航揽瓜杂柄跳盟纽酶联免疫吸附实验酶联免疫吸附实验1、间接法姐榴驴材峡亚掘垃愈绕才煮枣侥烹瞧此贱惊幅工捧恃钒咆庇循柞椭斟邹瑶酶联免疫吸附实验酶联免疫吸附实验2、双抗体夹心法褪减铺侮梧钉咬蛊票样挺泣侣戈锻钟酚洞富颧泻****助催皆俄氧亨永来过然酶联免疫吸附实验酶联免疫吸附实验3、竞争法誊丫樱泛崎低浩紫赫邻集私幌津遗扬氏亮搓尉爵恭侮牢锦粥泞子沼鼻丝辣酶联免疫吸附实验酶联免疫吸附实验实验材料——微量加样器、板占虚洲捞檄呵在畔仇披怜架捏乐吐