精品PPT课件--2.生物大分子分离纯化技术2.ppt

第二章生物大分子分离纯化技术
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微过滤
微过滤(microfiltration)是透析技术的进一步发展,它以多孔薄膜为过滤介质,让样品溶液通过多孔膜(超滤膜)过滤。它可以用于滤除小颗粒,使混浊液澄清,也可以收集纯的沉淀供进一步分析。
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1. 深层滤器(Depth Filter):
由纸、棉花或玻璃纤维制成。过滤时将颗粒保留在滤器的深层之内,滤器有较大的截面积和相当的深度,因而具有较大的容量。这种过滤法具有较快的流速。
缺点:滤层的孔径不一,变化范围较宽;基质具有广泛的吸附作用,因而造成样品的损失;基质破损碎片往往会造成样品的污染。
微过滤的类型
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2. 滤膜滤器(Screen Filter)
滤膜滤器的关键是超滤膜(Microfiltration Membrane),它的孔径均一,不能通过滤膜的颗粒截留在膜的表面。为了保证一定的流速,必须减压或加压。这类滤膜具有疏水性,所以在制造时常用表面活性剂处理,处理之后还要将表面活性剂清洗干净,以防止使用时对样品的污染。现在已有亲水性膜产品。
微过滤的类型
在线式可换膜过滤器
正压桶式滤器
针式样品过滤器
滤膜
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微过滤技术的应用
(1)溶液的澄清。生物样品溶液或细胞溶液常常由于低溶解度或变性而混浊,在用分光光度或荧光法测定时需要进行过滤,以加大溶液的透光性能。通过这种过滤方法也可用于滤除有些溶液中可能存在的细菌或微生物污染物。
(2)。
(3)细菌细胞的收集。虽然一般用离心法收集细胞,但若用超过滤法收集,则效率可提高近十倍。
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除了上述几方面的用途之外,微过滤技术用于蛋白质的浓缩也非常有效,只不过在过滤过程中需要进行搅拌,以阻止膜的堵塞而影响流速。这类滤膜对蛋白质及核酸类生物大分子也具有一定的吸附作用。
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盐析法
随着盐浓度不断增加,蛋白质的溶解度不断降低而沉淀析出,这称之为盐析(Salting Out)。
盐析作用是盐类使蛋白质脱去水化膜,同时压缩蛋白质分子周围的双电层,致使蛋白质分子相互聚集而沉淀。由于在合适的盐浓度下不同蛋白质的溶解度不同,所以分离几种蛋白质的混合溶液时,盐的饱和度由低向高逐渐增大。
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盐析实验应注意的问题

盐析时常用中性盐类,要求:不会引起蛋白质变性,溶解度大,。最常用的是硫酸铵。


浓盐对蛋白质有保护作用,一般盐析操作可以在室温下进行,但有些对热敏感的蛋白质宜在低温下进行。
4. pH
盐析时常选择在蛋白质等电点进行。

在相同盐析条件下,蛋白质浓度越大越易发生沉淀,但浓度过高时容易使其它杂蛋白共沉淀。。
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脱盐
用盐祈法分离纯化蛋白质后,常需要脱盐才能获得纯品,脱盐常用透析法或凝胶过滤法。
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冷冻干燥

冷冻干燥(Lyophilization Freeze-drying)又称升华干燥,是在低温、负压下进行干燥的方法。主要用于除去冷冻样品中的水分或其它溶剂,这是浓缩和干燥热敏性样品(如抗体)的有效方法之一。将溶液样品通过冷冻干燥变成固体样品不仅可以使样品稳定而有利于长期保存,也有利于样品的运输。
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