PGE_1对培养乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用.pdf.pdf

郑州大学硕士学位论文 PGE_1对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用姓名:宋丽杰申请学位级别:硕士专业:药理学指导教师:翁世艾 20020101 塑型盔芏亟主墅塞生丝塞12壁丝2 堕垦!塑壁薹塾墨:兰』塑堕壁望丝塾堑堡丝堡蕉堡旦 PGE。对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用研究生宋丽杰导师翁世艾付润芳郑州大学医学院药理学教研室450052 摘要心肌缺血再灌注损伤(Myocardial ischemia/reperfusion injury, IRI)是冠状动脉再通术(药物溶栓法、冠脉腔内成形术或冠脉搭桥术)后的重要并发症与致死原因之一,其机制尚未完全清楚。如何把握时机改善血流,治疗心肌缺血,同时采取细胞保护措施防治心肌缺血/再灌注损伤是现代心脏病学中的研究热点之一。前列腺素El(Prostaglandin El,PGEl),是前列腺素的一种, 具有扩张血管、改善微循环、稳定细胞膜、抑制血小板聚集、抑制细胞内钙动员等多种作用,是目前治疗血栓栓塞性疾病的药物之~。。为排除神经体液等因素的影响,本课题采用纯化培养的心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,从细胞水平研究 PGE,对体外培养的心肌细胞缺血再灌注损伤的直接保护作用及对细胞凋亡的影响,并对其作用机制进行探讨。实验采用新生Wistar乳鼠(1~3d),无菌条件下取出心脏, 塑捌厶兰螋土盟窒生造竖!;!丝! !鱼堡!塑!量垂塾亟兰坠塑璺丛型堡氩堑堡塑堡壅!王旦 %胰酶反复消化,收集心肌细胞悬液, 差速贴壁纯化后制成3×。的心肌细胞悬液接种至25ml培养瓶(测量MTT的接种到96孔培养板)培养,72h后用原代心肌细胞进行试验。用缺氧液置换正常培养液造成缺氧,用复氧液簧换缺氧液模拟再灌注损伤。实验分5组:正常细胞培养组、缺氧复氧损伤(H/R)模型组、缺氧复氧损伤+PGE、小剂量(5ng·ml一‘)绀、缺氧复氧损伤+PGE。中剂量(15 ng·ml‘1)组、缺氧复氧损伤+(45 ng·ml。1)组。分别检测以下指标:①心肌细胞形态学变化。⑦心肌细胞MDA含量及SOD活性:缺氧60rain再给氧30rain后,%胰酶消化使细胞脱落制成细胞悬液, 超声波细胞粉碎仪将细胞匀浆后,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力,硫代巴比妥酸显色法测定MDA含量。③细胞内线粒体脱氢酶活性:,MTI"染色法测定细胞光密度(OD)值。④乳酸脱氢酶活性:各组缺氧30min再给氧40rain后, 。⑤心肌细胞电镜超微结构: 缺氧30rain再给氧40rain后,%胰酶消化使细胞脱落制成细胞悬液,离心固定,超薄切片和双羟染色后以透射电镜观察其超微结构。结果显示: :倒置显微镜下,正常培养心肌细胞组细胞从第三天起成簇生长,搏动明显,细胞簇数量增多,细胞形状多样化,呈圆形、梭型及椎型,胞浆突起呈枝芽状,向细胞簇周围呈放射状生长,折光性强。缺氧复氧损伤后,胞体折光签型盔芏亟主塑塞笙地塞!!塑!! ￡鱼呈!苎[堡查塾基堂5塑丝垫墨丝塾塑堡丝堡壅监旦性下降,突起缩短或消失,搏动减弱或消失。PGE,各剂量组心肌细胞形态均较H/R组明显改善。 :H/± ·g~Pro,较正常对照组(±·g。Pro)明显下降。 PGE,5ng·ml。1组SOD活。|生(+ U·g。Pro)与模型组相比无统计学意义(尸>),而PGEll5 ng·ml一、45ng·ml‘1组,SOD 活性均较H/R组显著提高(+ U·g~Pro、 ±'g一1Pro)(尸<). :H/R组脂质过氧化反应较强烈,+ runol-m91Pro升至 ±·mg‘1Pro(P<),±、±、1|38±(nmol-mg。Pro), 与模型组相比均有明显差异(P<),提示PGE,对心肌细胞具有明显抗脂质过氧化作用。 :OD值大小反映细胞内线粒体脱氢酶的活性。H/R组细胞OD值(+)较对照组( ±)明显下降(P<),PGE,各剂量组OD值均较H/R 组升高(±、±、±)(P<