Bridging+integrator1在胃腺癌中的表达及预后价值.pdf

硕士学位论文 BINl在胃腺癌中表达及预后的初步研究硕士生:刘传新导师:罗荣城教授摘要胃癌是世界第4大常见肿瘤。尽管近半世纪以来全球胃癌发病率有所下降, 但在中国的发病却率逐年上升。胃癌的分类可分为早期胃癌及进行性胃癌,临床表现症状则是模糊且不具特异性。大部份诊断出胃癌的病人被发现时都已经是进行性疾病来呈现。统计发现超过50%的病人会进行手术,但是手术之后, %的病人发生转移。转移性的胃癌仍然是一种无法治愈的疾病。一般而言,胃癌病人平均五年的存活率大约22%左右,而晚期胃癌患者的五年的存活率更小于5%以下。化学疗法已经成为胃癌治疗不可缺少的方法之一,缓和的化学疗法已经被证明能提高存活率或末期生活品质。近年来科研人员一直在努力深入理解胃癌的生物学特性,以期提高早期诊断、预后和最终治愈,然而由于缺乏统一标准的化疗、放疗和手术切除,晚期胃癌患者的治疗结果很不理想。因此,阐明胃癌的发病机制,争取早期诊断,寻求有效的治疗手段是亟待解决的重要课题。胃癌的发展是受多种因素影响,许多致癌基因和肿瘤抑制基因参与其中,而最主要的是遗传学及表观学的异常。其中癌基因的激活与抑癌基因的失活是其重要的遗传学基础。相对于因功能获得性变异而导致的癌基因激活,抑癌基因的失活源自功能失去性变异,提高了肿瘤易感性,在肿瘤的发生、发展过程中起着更大的最用。鉴定参与胃癌形成的新基因,对这些基因的生物学性质进行研究,将有助于我们开发早期诊断方法,进行靶向治疗。本研究课题以与胃腺癌相关的候选抑癌基因BINl为研究对象,检测了它们在胃腺癌中的表达情况,并初步探讨了关于预后方面的可能因素。摘要 Bridging integrator 1(BINl)是由染色体2q14-2q21上长度达59258 bps的 DN***段中的16个外显子编码,是新鉴定的有肿瘤抑制基因特征的人类基因产物。BINl最初是由于它可干涉并抑制cMye诱导的癌变而被鉴定的。Sakamuro 等发现在人乳腺癌细胞株MCF7和乳腺癌组织中存在BINl的缺失。另一些研究发现BINl基因在乳腺癌、前列腺癌和恶性黑素瘤中表达下调或失活,其异位再表达与细胞程序化死亡过程有关。Kai等发现BINl的缺失与乳腺癌进展有关。此外,,50%的小鼠自发产生肺癌,10%的小鼠产生肝癌。上述结果提示BINl可能具有肿瘤抑制基因的功能。本研究诣在检测BINl在胃腺癌中的表达情况,分析其与临床病理参数及预后的关系,探讨其在危险中发挥的作用机制。材料与方法患者肿瘤组织样本经南方医院伦理委员会批准和签署知情同意书后,从2003年到2006年之间在南方医院接受手术的胃腺癌患者中,获得234份石蜡包埋的胃腺癌样本。所有的患者均未接受术前治疗。患者包括157位男性和77位女性,平均年龄 58岁()。所有的组织块均切割成49m厚连续切片。组织学分型按照世界卫生组织的分类标准进行。从2005年到2007年之间在南方医院接受手术切除的胃腺癌患者中,获得另外共计51份新鲜肿瘤组织和相邻的非肿瘤组织样本。患者均未接受任何术前治疗。患者包括32位男性和19位女性, 平均年龄50岁(年龄范围为21—76岁)。所获得的组织样本立即浸入RNAlater (Ambion Inc.,USA),保存于-800C。所有的患者均按照第7版国际抗癌联盟()$311中瘤、淋巴结及远处转移(TNM)分期系统进行分期。荧光定量PCR(RT-qpCR) 按照厂商说明,使用TRIzol溶液(美国Invitrogen公司)从约150 mg原发性肿瘤中提取总RNA。使用无RNase的DNase消除DNA污染。用NANO DROP 硕士学位论文分光光度计(,美国ThermoScientific公司)在260衄测得光密度值, 计算总RNA浓度。根据厂商的建议,使用2嵋总RNA和M-MLV反转录酶(美国Promega公司)反转录(RT)合成第一条链eDNA。所产生的cDNA进行荧光定量PCR,对GAPDH(内参基因)和BINl的相对表达水平进行评估。相应的引物对:BINlsense:5’TGCTGTGGATGG-3’; BINlantisense:5'-CGTGACTTGATGTCGGGGAACT一3’:GAPDHsense: 5'-TGTTCGACAGTCAGC一3’:GAPDHantisense: 5’.CCCAAl'GTT-3’。使用Roche LightCycler⑧480荧光定量PCR仪进行基因特异性扩增。15“l PCR反应混合物包括:,“l 2×SYBR Green主混合液(美国Invitrogen公司)以及每对寡核苷酸引物200nM。扩增反应条件为: