top2a在胃癌中表达及top2a低表达胃腺癌细胞模型建立.pdf

军医进修学院博上学位论文 ToP2A在胃癌中的表达及ToP2A低表达胃腺癌细胞模型的建立中文摘要【目的l由于拓扑异构酶II a(Topoisomerase IIa)基因TOP2A在染色体分离、配对、浓缩、结构形成及改变DNA超螺旋结构有重要的作用,并且又是很多肿瘤化疗药物的作用靶点,因此它在肿瘤治疗中引起了特殊的关注。我科基因芯片结果发现胃腺癌组织中的TOP2A明显高表达,本课题拟通过病例调查,明确TOP2A在人胃癌组织中的表达特征,并进一步建立TOP2A基因低表达的胃腺癌细胞模型,明确抑制TOP2A蛋白表达对其生物学行为的影响,为将来探讨TOP2A蛋白表达对topolI抑制剂的疗效的预测作用提供良好的基础。 f方法l本研究共分两部分:第一部分,首先从2004年--2008年从本院就诊的胃癌患者中筛选出做TOP2A蛋白免疫组化染色患者200例,根据其TOP2A 蛋白表达量的高低及分化程度、病变部位分组进行统计分析;其次,用Western Bloting(WB)法检验胃癌细胞株MGC一803、 中TOP2A蛋白的表达。第二部分,设计构建针对TOP2A基因的shRNA(small hairpinRNA,短发夹RNA)重组表达质粒pSRZTop IIa并转染至G3T-hi包装细胞,收集绿色荧光蛋白表达阳性的包装细胞病毒上清,测定病毒滴度, 、,流式分选阳性克隆,扩增并培养。WB检测三株目的细胞感染重组逆转录病毒pSRZTop 110‘后细胞内TOP2A的表达情况,并用细胞生长曲线的方法记录感染病毒前后细胞生长状态及活性的变化。 I结果】第一部分,200例TOP2A蛋白表达阳性患者其表达量的高低与患者年龄、性别、胃癌分化程度及胃癌部位并无相关性;、 bloting检测,均有 TOP2A的表达。第二部分,酶切及测序鉴定pSRZTop a质粒构建成功, pSRZTop IIQ表达质粒转染至G3T-hi包装细胞后收集病毒上清, 107,由此证实逆转录病毒构建成功;目的细胞感染病毒并分选后进行荧光显微镜观察,64h的荧光蛋白表达比率较17h明显增高, 3 军医进修学院博士学位论文证实逆转录病毒感染目的细胞成功,三株目的细胞感染后TOP2A蛋白表达较阴性对照组明显降低,,各时间点细胞计数值明显降低。【结论l ; TOP2A基因的表达可以相对抑制肿瘤细胞的生长; 的腺癌细胞模型成功。 l关键词l拓扑异构酶II伐,胃癌,逆转录病毒,细胞模型,低表达 4 军医进修学院博十学位论文 Expression ofTOP2A arcinoma AND Construction ofTOP2A Model jn theGastric Adenocarcinoma Cell Abstract 【obieetivel TOP2A isofparticular interest with respect tocancertherapeutics, because itisvitalinthe segregation ofnewly replicated chromosome pairs,in chromosome condensation,in forming chromosome scaffolds,and in altering DNA superhelicity,and even more importantly,it isalsothemolecular target for a largegroup ofclinicallyrelevantanti—CanCer drugs termedtopolI— foundthehigher levelofTOP2A inthegastricadenocarcinoma according tothe gene chip research was prepared toidentify the distinction of TOP2A inthehuman gastric carcinoma we canidentify the effect between differentexpression ofTOP2A tothe biolo