一氧化氮合酶抑制剂对局灶性脑缺血大鼠脑线粒体损伤的影响.pdf.pdf

河北医科大学硕士学位论文一氧化氮合酶抑制剂对局灶性脑缺血大鼠脑线粒体损伤的影响姓名:李永辉申请学位级别:硕士专业:药理学指导教师:张建新 20050301 中文摘要一氧化氮合酶抑制剂对局灶性脑缺血大鼠脑线粒体损伤的影响摘要脑血管疾病严重威胁人类健康,是导致人类死亡的重要因素之一,幸存者也往往留下后遗症,给家庭和社会带来很大负担。因此,探索脑缺血的病理生理,研究抗脑缺血的药物极为重要。近年来,对其损伤机制的研究正逐渐深入,除兴奋毒、钙超载、炎症外,还包括一氧化氮、自由基、线粒体损伤等,但有效的治疗手段仍然缺乏。目前,临床上治疗脑缺血以溶栓为主,治疗效果不很理想。一氧化氮(NO)由L一精氨酸在一氧化氮合酶(NOS ) 作用下生成,是一种具有高度活性的信使小分子。近年来, 随着对NO研究的逐渐深入,发现NO参与缺血性脑损伤的发展,并具有双重作用。以往研究发现,一氧化氮合酶抑制剂对缺血性脑损伤有着很好的保护作用:可以减轻局灶性脑缺血大鼠神经症状,减少脑梗塞面积,光镜观察脑梗塞区病变范围、病变神经元数目明显减少,细胞间质水肿程度明显减轻,降低脑组织MDA含量以及提高SOD的活性。本研究课题采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型,电镜观察脑缺血后神经元线粒体超微结构的改变,差速离心法提取缺血侧脑组织线粒体,试图在线粒体水平上探讨不同类型的NOS 抑制剂、在不同时间给药对脑缺血的治疗作用及其机制。中文摘要第一部分氨基肛对局灶性脑缺血大鼠脑线粒体损伤的影响目的:观察选择性诱生型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂氨基K(Aminogunidine, AG)对局灶性脑缺血大鼠脑线粒体损伤的作用,以探讨其改善缺血性脑损伤的作用机制。方法:将大鼠随机分为假手术组、缺血对照组、AG治疗组,采用线栓法制备大鼠大脑中动脉梗塞(MCAO)模型, 分别于缺血后2小时、6小时、12小时给药治疗3天,迅速断头取脑,差速离心法提取缺血侧脑组织线粒体,测定线粒体膜肿胀度及线粒体活力,测定线粒体总ATP酶、超氧化物歧化酶(SOD)、谷肤甘肤过氧化物酶(GSH-Px )活性,以及一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)含量;电镜观察了缺血后皮层神经元超微结构的改变及AG对此改变的影响。结果:1在大鼠MCAO后线粒体膜肿胀程度明显增加, 表现为540nm处吸光度值降低(P<);同时线粒体活力明显下降(P<)。缺血2h, 6h, 12h给予AG治疗3d与缺血对照组相比线粒体膜肿胀程度有所下降(P<),线粒体活力明显恢复(P<). 2大鼠MCAO后脑组织线粒体NO含量明显增加(P<),缺血2h, 6h, 12h给予AG治疗3d与缺血对照组相比NO含量明显下降(P<). 3在大鼠MCAO后线粒体总ATP酶、SOD, GSH-Px 活性均明显下降(P< ),线粒体MDA含量明显升高(P<)。缺血2h, 6h, 12h给予AG治疗3d与缺血对照组相比总ATP酶, SOD, GSH-Px活性均显著升高(P<), MDA含量明显下降(P<). z 中文摘要 4电镜结果显示脑缺血后皮层神经元水肿,线粒体肿胀、峭断裂、溶解、消失,且随缺血时间延长损伤加重;AG 能明显改善脑缺血引起的神经元水肿、线粒体肿胀和空泡化口结论:AG能明显抑制脑缺血后线粒体NOS活性,减少NO过量生成,增强线粒体总ATP酶、SOD, GSH-Px活性,减少MDA含量,改善线粒体能量供应,增加线粒体抗氧化作用,增强线粒体活力,改善脑缺血引起的神经元水肿、线粒体肿胀和空泡化,从而减轻脑缺血损伤。第二部分N(;-硝基一L-精氨酸对局灶性脑缺血大鼠脑线粒体损伤的影响目的:观察非选择性一氧化氮合酶抑制剂No一硝基一L- 精氨酸(NG-nitro-L-arginine, L-NA)对局灶性脑缺血大鼠脑线粒体损伤的作用,以探讨其改善缺血性脑损伤的作用机制。方法:将大鼠随机分为假手术组、缺血对照组、L-NA 治疗组,采用线栓法制备大鼠大脑中动脉梗塞(MCAO)模型,分别于缺血后2小时、6小时、12小时给药治疗3天, 迅速断头取脑,差速离心法提取缺血侧脑组织线粒体,测定线粒体膜肿胀度及线粒体活力,测定线粒体总ATP酶、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胧甘肤过氧化物酶(GSH-Px )活性, 以及一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)含量;电镜观察了缺血后皮层神经元超微结构的改变及L-NA对此改变的影日句。 s 中文摘要结果:1在大鼠MCAO后线粒体膜肿胀程度明显增加(P<)同时线粒体活力明显下降(P<)。缺血12h 给予L-NA治疗3d与缺血对照组相比线粒体膜肿胀程度有所下降(P<);线粒体活力明显恢复(P<);缺