PCR的技术应用及其发展.doc

PCR的技术应用及其发展.docPCR技术的应用11生科1108110171引言人类利用微生物的实践具有悠久的历史,公元前,人类就已经利用天然的微生物(酶)生产奶酪和酒。进入工业革命时代,人们开始对天然微生物进行筛选和诱变,生产某些简单的代谢产物,氨基酸,维生素和抗生素。20也纪60年代至今,随着人类虽微生物认识的加深,DNA重组技术的出现,发酵技术的提高:更多的微生物可产生各种律样的抗生素,应用于医学微生物学(MedicalMicrobiology)中;更多微生物被发现可产生促生物质,有利于人和动植物的生长,对农业科学(Agriculture)有着极重要的支持;还有些微生物的代谢产物是重要的化工原料,加速了化工•产业(ChemicalIndustry)的完善;再有些微生物被广泛应用于法医鉴定(Forenic)、医学(MedicalScience)>环境监测(EnvironmentSupervise)分子克隆(MemberClone)>序列分析(AlignmentAnalysis)、考-占研究(ArchaeologySearch)等重要学科,具有广泛的应用前景,这就是我要介绍的PCR技术。2PCR技术原理下面我通过摘录了一个实验⑵,来介绍一下PCR技术的过程及其原理(至于它详细的实验过程和方法详见参考文献)。.在94°C高温下双链变性,分离出DNA单链的模板,然后降温(55。0,然添加的与DNA单链配对,紧接着温度升高(72。C),在DNA聚合酶的作用下,脱氧核廿三磷酸开始渗入,并从引物的结合端开始,按5'-3'方向延伸,合成出新生的DNA互补链,这一过程称为一循环,然后重复该循环,模板DNA被大量复制。在此,我要特别强调几点注意事项,这也是这个实验设计者提醒我们需要注意的地方:⑴在配置PCR反映体系的过程中,Taq蟾应在加入dNTP混合物后加入,因为有些酶的3'-5‘的外切酶反应较强,反映体系如果不含dXTP,反应体系中的引物可能被分解。非特异性扩增产物,可能是模板有与引物同源性高的其他位点,其次是复性温度太低,适当提高复性温度就可以解决这些问题。3PCR技术分类PCR技术自从1985年由Millus创立后,经历了20年的飞速发展,是传统微生物学与现代基因学之间的完美结晶,已成为当今世界上不可或缺的一项重要的微生物应用技术,下面我将介绍几种常用的PCR技术⑶1反转录PCR反转录PCR(reversetranscriptionPCR,RT-PCR)即以RNA分子为模板的扩增技术,主要用于克隆cDNA、检测RNA病毒、合成cDNA探针机构建RNA高效转录系统。(quantitativePCR)的基本原理是。假定其反应产物的数量同反映混合物中起始模板的mRNA或DNA的量成正比,因此通过琼脂糖电泳样品条带得比较,便可以确定两种PCR产物之间的数量关系。另外定量PCR还有广义和狭义之分",在此就不详细介绍了。(real-timequantitativePCR)技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用映光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过校正曲线对未知模板进行定量分析的方法。该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,还具有特异性更强、有效解决了PCR污染问题、自动化程度高等特点,bl前己得到广泛应用。