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猪用生物制品及相关猪源原辅材料中非洲猪瘟病毒核酸检测方法.docx


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。。。(如组织、血清、胰酶衍生物等)。,按瓶签注明头份用适宜稀释液分别稀释成10头份/,等量混合,取混合液进行核酸提取。,等量混合后进行以下处理。,,充分振荡混合1分钟,2~8℃冰箱静置不少于60分钟,直至油相和水相分离。取水相进行核酸提取。,摇匀,-odn(人工合成的寡聚核苷酸),放入摇床(200r/min)37℃解离1小时,5000r/min离心10分钟,取上清液进行核酸提取。。,按活疫苗进行取样和处理;液体制品及半成品,取至少2份(瓶)样品,等量混合,取混合液进行核酸提取。。冻干毒种,按冻干前体积复溶后等量混合,取混合液进行核酸提取;非冻干毒种,等量混合后直接取混合液进行核酸提取。,。,分别取样和处理。,研磨后用5倍体积灭菌PBS悬浮,70℃灭活30分钟,4℃下以2000~3000g离心10分钟,取上清液进行核酸提取。,等量混合,取混合液进行核酸提取。,取至少2份样品,%浓度的溶液,等量混合,取混合液进行核酸提取;液体胰酶,取至少2个最小包装的样品,等量混合,取混合液进行核酸提取。、液体或干粉状猪源衍生物,可分别按组织、血清或干粉状胰酶的方法进行取样和样品处理。,如***仿、异丙醇、无水乙醇、(含10%乙醇)、75%乙醇等。;常温台式离心机;旋涡振荡器;水浴锅;微量移液器1套(最大量程分别为10µl、100µl、200µl、1000µl)。、无菌吸头(0~10µl、0~200µl、100~1000µl)、一次性乳胶手套。(TRIZOL法),也可以选择其他等效核酸提取方法提取样品中的DNA。µl,加入750µlTrizol,颠倒混匀,室温放置5分钟。µl***仿,充分混匀,室温放置10分钟,4℃下以12000g离心15分钟。,加入220µl无水乙醇,颠倒混合,15~30℃放置2~3分钟,2~8℃以2000g离心5分钟,沉淀物为DNA。,加入含10%µl洗涤DNA,15~30℃放置30分钟,2~8℃以2000g离心5

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