核酸化学 PPT.ppt

第五节核酸的某些理化性质及核酸研究常用技术一、核酸的紫外吸收(λmax=260nm)二、核酸的变性三、核酸的复性和分子杂交四、核酸的沉降性质1核酸具有酸性;粘度大;由于嘌呤碱和嘧啶碱有共轭双键,能吸收紫外光,最大吸收峰为260nm。故常用紫外分光光度法测定核酸的含量。一、DNA的紫外吸收2二、DNA的变性在理化因素作用下,DNA双螺旋的两条互补链松散而分开成为单链,从而导致DNA的理化性质及生物学性质发生改变,这种现象称为DNA的变性(denaturation)。引起DNA变性的因素主要有:①高温,②强酸强碱,③有机溶剂等。3DNA的变性过程加热部分双螺旋解开无规则线团链内碱基配对4①增色效应(hyperchromiceffect):指DNA变性后对260nm紫外光的光吸收度增加的现象;②粘度降低③生物学功能丧失或改变。(nm)光吸收1236加热DNA溶液,使其对260nm紫外光的吸收度突然增加,达到其最大值一半时的温度,就是DNA的变性温度(融解温度,meltingtemperature,Tm)。DNA的变性温度7Tm的高低与DNA分子中G+C的含量有关,G+C的含量越高,则Tm越高。8大家有疑问的,可以询问和交流可以互相讨论下,但要小声点9核酸的变性、复性和杂交变性(加热)探针杂交(缓慢冷却)复性(缓慢冷却)变性:在物理、化学因素影响下,DNA碱基对间的氢键断裂,双螺旋解开,这是一个是跃变过程,伴有A260增加(增色效应),DNA的功能丧失。复性:在一定条件下,变性DNA单链间碱基重新配对恢复双螺旋结构,伴有A260减小(减色效应),DNA的功能恢复。10