临床医学论文单链抗体A7基因真核表达载体的构建.doc

临床医学论文单链抗体A7基因真核表达载体的构建.doc【摘要】[目的]构建抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体A7基因的真核表达载体,为单链抗体A7基因的真核表达及基因治疗重症肌无力奠定基础.[方法]应用PCR技术,从已构建的含有抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体A7基因的重组原核表达载体pHEN2单链抗体A7上扩增单链抗体A7基因并纯化,将纯化后的PCR产物经EcoRl和Avril双酶切后,用低熔点琼脂糖凝胶电泳同收并纯化,再与经同样酶切并纯化的真核表达载体pPIC9K连接,将其产物转化至大肠杆菌DH5a后扩增,再用Avril和EcoRI酶切和测定序列检查ScFvA7基因插入的准确性,[结果]构建pPIC9K-ScFvA7重组载体,经序列测定检查核昔酸序列正确,旦ScFvA7基因准确地克隆至载体开放读码框架内.[结论]成功地构建了抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体A7基因的真核表达载体.【关键词】重症肌无力;抗体;真核表达载体ABSTRACT:binanteukaryoicexpressionvectorofthesinglechainvariablefragment(ScFv)A7ofantibodyagainstthemainimmunogenicregion(MIR)ofacetylcholinereceptor(AChR)herapyinmyastheniagravis(MG).binantprokaryoticexpressionvectorpHEN2-ScFvA7,,-]-(ORF)-:myastheniagravis;antibodies;eukaryoticexpressionvector重症肌无力是抗乙酰胆碱受体(acetylcholinereceptor,AchR)抗体介导的器官特异性自身免疫病,AchR是由a23Y6等