葛根素通过ERK信号通路促进骨髓间质干细胞成骨分化.pdf

学位论文版权使用授权书I嗍璎本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权江苏大学可以将本学位论文的全部内容或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口,在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口。学位论文作者签名:M 指导教师签名: 枷Ir年占月f厂日年月日万方数据独创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下, 独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外, 本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名: 日期:如·了年易月Ir H 万方数据江苏大学硕士学位论文摘要目的:在体外扩增培养的过程中,探讨不同浓度的葛根素对人骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcell)生物学特征的改变及成骨分化调控作用机制, 从而为将来间质干细胞和葛根素临床应用提供一些理论依据。方法:(1)分离培养骨髓间质干细胞,采用全骨髓直接贴壁法。借助于形态特征、表面抗原标记等对其进行生物学特性鉴定。(2)运用MTT法检测葛根素对骨髓间质干细胞增殖能力和生长曲线的影响。(),检测不同浓度葛根素对骨髓间质干细胞衰老的影响,碱性磷酸酶染色检测不同浓度葛根素对骨髓间质干细胞成骨分化,油红O细胞化学染色检测其成脂分化能力,流式细胞仪分析检测其细胞凋亡情况,采用transwell迁移实验检测不同浓度葛根素对骨髓间质干细胞迁移能力的差异,,采用Western blot检测不同浓度葛根素对骨髓间质干细胞ERK蛋白表达的影响(3)采用GraphPad ,当p<,认为差异有统计学意义。结果: (1)从骨髓组织中分离出一种长梭形细胞,经纯化后流式细胞仪鉴定符合间质干细胞相应表面标志:CD29(+),CD44(+),CD90(+),CDl05(+),CD34(.)及 (.)。(2)不同浓度葛根素对骨髓间质干细胞形态的改变,DAPI染核显示,在对照组细胞核中DNA呈均一分布,而实验组细胞核则呈现比较明显的DNA点块状聚集。(3)MTT检测结果显示,增殖能力随着葛根素浓度增加而下降。流式细胞凋亡显示,随着葛根素浓度增加,凋亡细胞的数量也在增加,此外,transwell迁移实验显示, 随着葛根素浓度增加,细胞的迁移能力下降。(4)分化能力:成骨诱导14天,碱性磷酸酶染色显示,与对照组相比,实验组细胞诱导分化能力均随葛根素浓度的增加而增加。(5)基因表达:,与对照组细胞相比,实验组ALP mRNA表达量表达上调。(6)western blot:细胞蛋白p—EIⅨ和ERK表达随葛根素浓度的增加而增加。结论:葛根素对骨髓间质干细胞活性能够产生影响。在一定范围内,葛根素通过 ERK信号通路对其成骨分化有促进作用。关键词: 骨髓间质干细胞,葛根素,成骨分化,信号通路万方数据葛根素通过ERK信号通路促进骨髓间质干细胞成骨分化 ABSTRACT Objective In the process of in vitro amplification of cultured explore different concentrations ofpuerarin on biological characteristics ofhuman bone marrow mesenchymal stem cells tochange and osteogenic differentiationregulmion mechanism,which provides some theoretical basisforthefuturebetween mesenchymal stem cellsand clinicalapplication ofpuerarin. Methods(1)Isolation and culture ofmesenchymal stem cells,the use ofwhole bone marrow adherentmethod means ofmorphology,surface antigen markers such as itsbiologicalcharacterization.(2)MTT assay using theinfluence o