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文档分类:高等教育

能够在苏云金芽孢杆菌营养期表达载体构建及新型杀虫蛋白基因vip鉴定.pdf


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能够在苏云金芽孢杆菌营养期表达载体构建及新型杀虫蛋白基因vip鉴定.pdf
文档介绍:
密级: 分类号:0344 单位代码: 学号: 10422 200711449 ∥第办孑硕士学位论文 Shandong UniversityMaster's Thesis 论文题目:p204注射对斑马鱼胚胎发育和早期骨形成的影响 Effectsofp204 Injection onZebrafish’sEmbryonic Development and OsteobIastogenesis 作者姓名赵海滨专业发育生物学导师时永香副教授 2010年4月 0日原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名:塾堕堡: 日期: 兰!!:坚j弓7 关于学位论文使用授权的声明本人同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的印刷件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名:坌!鱼堕导师签名:塑壹盘日期:翌型!:旦墨:型山东大学硕士学位论文目录目录.???..??....?........???..?...?.1 符号说明........??....?.?.?.??....?.......3 中文摘要........???..?....?..??...??....9 英文摘要???..????...??????..?11 1前言???.......??????????..?13 l刖舌???.......??????????..?13 1.1哺乳动物骨发生过程及相关的信号通路与分子???????????..13 1.2p2D4的生物学作用???????????????????.15 1.3模式动物斑马鱼????????????????????.16 1.4研究思路及意义????????????????????.18 2实验材料与方法.??.?.???..???.??..20 2.1实验材料、试剂与仪器??????????????????.20 2.1.1实验动物????????????????????.20 2.1.2主要实验试剂???????????????????20 2.1.3主要实验仪器???????????????????23 2.2实验方法??????????????????????23 2.2.1p2D4-EGFP融合蛋白表达载体的构建????????????.23 2.2.1.1斑马鱼基因组DNA的提取与检测???????????..23 2.2.1.2巢式PCR法扩增post(promomrofosmocalcin)???????..23 2.2.1.3p204的扩增?????????????????.24 2.2.1.4表达载体的构建????????????????.25 2.2.2将构建好的表达载体显微注射到斑马鱼受精卵中????????..29 2.2.2.1显微注射针的制作???????????????..29 2.2.2.2胚胎注射??????????????????.29 2.2.3p204注射后的表达检测????????????????30 2.2.3.1荧光显微观察?????????????????30 2.2.3.2Real-廿meRT-PCR????????????????30 山东大学硕士学位论文 2.2.3.2原位杂交??????????????????.32 3实验结果??????.????.??..??.36 3.1p2D4-EGFP表达载体构建结果????????????????.36 3.1.1斑马鱼基因组DNA提取后检测结果????????????.36 3.1.2巢式PCR扩增post检测结果??????????????..36 3.1.3pEGFP-N1质粒扩增后检测结果??????????????37 3.1.4p204基因的扩增检测结果???????????????.38 3.1.5pEGFP-post,pEGFP-p204,pEGFP·p岱t-p204载体构建结果??????..38 3.2p204注射后产生的畸形胚胎及统计分析?????????????.39 3.3p204注射后表达检测结果?????????????????.40 3.2.1p204荧光显微观察结果????????????????40 3.2.2real-dineRT-PCR结果????????????????..41 3.2.3nanx2b原位杂交实验结果???????????????.45 4讨论..??.??.?????????...?..47 4.1p204注射诱导产生斑马鱼畸形胚胎??????????????..47 4.2p204注射到斑马鱼胚胎中的表达模式??????????????48 4.3runx2b原位杂交????????????????????49 4.4斑马鱼基因组的提取???????????????????49 4.5巢式PCR方法扩增启动子序列????????????????50 4.6启动子序列的测定???????????????????..52 4.7斑马鱼用于研究骨发生机制的展望???????????????52 5结论??..??.....?.???..???........54 附图???????....??..?????.?.54 2 山东大学硕士学位论文符号说明 3 山东大学硕士学位论文_——-__——__-—-————-—————_—---—-——--_—————————-●————_—一一—一 BCIP 5-bromo,4-chioro,3-indolyl phosphate 5.溴_4.***.3.吲哚磷酸一 MSCs mesenchymaI stem cells 间充质干细胞 p204注射对斑马鱼胚胎发育和早期骨形成的影响中文摘要哺乳动物骨骼的发育经过了多步过程,包括早期骨的图式形成、问充质细胞分化为成骨细胞系和软骨细胞系、造血干细胞分化为破骨细胞系,以及前体细胞终末分化为三种类型的细胞,即软骨细胞、成骨细胞和破骨细胞。成骨细胞的发生是一个非常复杂的过程,与多种信号通路相关,如TGF—B信号通路、W吣唐号通路、FGF信号通路、Hedgehog信号通路等。在这些信号通路中,转录因子 Cbfal/Runx2(core binding factora1)起关键作用,是成骨细胞分化和发生最重要的转录因子。 p赚小鼠干扰素诱导p2。o蛋白家族的成员之一,这一蛋白家族的成员通过与靶蛋白(包括转录因子,信号蛋白,肿瘤蛋白和肿瘤抑制因子)的结合来调节其活性,在细胞增殖和组织分化中起着重要的作用。已有研究表明,p204
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  • 时间2016-03-21