足细胞分子α-actinin-4和ZO-1在糖尿病大鼠肾组织的表达及贝那普利对其干预研究分析.pdf

河北医科大学硕士学位论文足细胞分子α-actinin-4和ZO-1在糖尿病大鼠肾组织的表达及贝那普利对其干预的研究姓名:殷玉红申请学位级别:硕士专业:内科学指导教师:李英 20080301 河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果,其知识产权归河北医科大学所有。河北糕科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文,第一署名单位为河北医科大学,试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则, 承担相应的法律责任。一’.。.囊’一。.. 研究雌名:器静≯导师签名毋学院领导警毒易.≯峙 y。扩每≥弱’?Et,屯。。 j。\、; 河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写, 文责自负。研究生签名:私办妒导师签名:秒年; 。1在糖尿病大鼠肾组织的表达及贝那普利对其干预的研究中文摘要星的:糖尿瘸在我国有较高的发病率,糖尿病肾病是构成终末期肾衰竭的主要危险因素。蛋自尿是糖尿病肾病的主要临床表现,也是糖尿病肾病进展的独立危险因素。蛋白尿的发生主要与肾小球滤过屏障有关。滤过屏障由内皮细胞窗孔,基底膜及足细胞之间的裂孔隔膜组成。在糖尿病肾病进展过程中足细胞足突融合,足细胞数冒减少。最近的研究显示足细胞actin网架结构改变是足突融合、消失和蛋白尿发生的先决条件。Actinin(辅肌动蛋白)是一类actin的结合和交联蛋白,可以将松散的肌动蛋白actin交联成具有收缩力的纤维束,对于锚定纤维束至胞浆膜具有辅助作用。& ~actinin一4是actinin家族的新成员之~,有研究发现编码Q-actinin-4的基因ACTN4突变可导致局灶节段性肾小球硬化的发生,足细胞Q-actinin一4表达的改变与足突融合,蛋白尿的产生密切相关。ZO-1是一种连接蛋白,在上皮细胞闻的紧密连接处表达。在肾小球,Z0一王起到将足细胞闻的裂孔隔膜连接到足细胞的细胞骨架上的作用。Z0一l 在上皮细胞间的紧密连接处的正确定位及表达对于细胞间通透性的维持具有重要作用。足细胞是位于肾小球滤过膜最外层的细胞。在Pima .Indian 2型糖尿瘸病人身上发现在糖尿瘸肾病发展过程中, 足细胞数星明显减少,足细胞数邂减少的程度与蛋白尿的程中文摘要度里正相关,而且与进展至终末期肾衰竭(ESRD)的快慢相平行。在实验性糖尿病动物的研究发现,足细胞的减少可被 RAS阻断剂ACEI类药物所改善。本实验应用糖尿瘸大鼠模型,观察糖尿瘸大鼠肾组织中程一actinin一4,ZO—i蛋叁及戮赋盎的表达变化以及在糖尿病肾瘸发生、发展过程中足细胞数躁的变化,探讨a —actinin一4,Z0-1分子在糖尿病肾病蛋白尿形成中的可能作用,皿管紧张素转化酶抑制剂贝那普利对糖尿病大鼠肾组织足细胞数匿、程-actinin一4、Z铲王蛋自和懑黼表达变化煞影响,及其肾保护作用的撬制拳方法:采用健康雄性SD大鼠S4只,体重170-2209, 随机抽取18只作为正常对照组,其余36只大鼠给予2%链脲菌素(STZ)60mg/Kg~次性腹腔注射。72小时血糖》 ,而后随视分为糖尿病组期贝那普剩予预组各王8只。贝那普利于预组给予哭那普,剩lOmg/,每旦~次,正常对照组与糖尿病组仅给予等量自来水灌胃,每日~次。实验期间大鼠自由饮水、标准饮食,不使用胰岛素及其他降糖药物。实验开始后第8 周、圭2周各组任取6只大鼠测定盘糖、盘胍酐、愿瓿酐、肾重/体重,诗算觏酹清除率、尿囱蛋鸯排泄率。处死大鼠, 留取左肾皮质,分别做组织学、超微结构,免疫组织化学方法检测肾小球a-actinin~4、 Z0—1蛋白表达及wT一1标记的足细胞数目,应用RT—PCR观察a—actinin~4、ZO~ImRNA 在肾组织中的表达。结果:在8周、王2周,糖尿瘸组盘糖、舰酐清除率、·肾重/体重、尿爨蛋囱排泄率较正常对照组均有不同程度的中文摘要升高(P<)而贝那普利干预组肌酐清除率、肾重/体重、尿自蛋白排泄率显著低予同时期耱尿瘸组<P<0。05)。肾小球光镜病理切片PAS染色糖尿病组嗜PAS物质较同时期正常组明显增多,电镜观察糖尿病组在8周时出现基底膜不规则增厚,系膜区增宽,上皮细胞足突敲合,12周时上述变化更加显著,贝那普利干预组较同时期糖尿病组变化明显减轻。糖尿病组大鼠肾组织Q-actinin一4蛋白及mRNA表达在两个时闻点较正常组均明显增加<