阻断腺苷A1受体表达上调对脑缺血耐受诱导的影响.pdf

河北医科大学硕士学位论文阻断腺苷A1受体表达上调对脑缺血耐受诱导的影响姓名:郧晓静申请学位级别:硕士专业:病理学与病理生理学指导教师:李文斌 20070301 中文摘要阻断腺苷M受体表达上调对脑缺血耐受诱导的影响摘要目的:研究表明,腺苷在脑缺血耐受(brain ischemic tolerance,BIT)的形成中发挥重要作用,即脑预缺血(cerebral ischemicpreconditioning,CIP)引起脑细胞合成和释放腺苷增加,后者与特异性受体结合发挥对神经元的保护作用,使之耐受损伤性缺血。但是,由于体内存在高效的腺昔灭活机制, CIP诱导的腺苷释放不一定能持续到随后严重的缺血损伤。因此,与腺苷相比,在BIT诱导过程中腺苷受体(adenosine receptor,AR)的数量增多和活性增强可能发挥更重要的作用。我室应用放射性配基法证实,Cm确实可使腺苷受体数量增多和亲和力增强,并可持续到损伤性缺血后l一7d,与 CIP诱导和维持的缺血耐受时间相吻合;并通过免疫组化证实,CIP引起的海马锥体神经元上表达增多的腺苷受体为Al 亚型。为进一步证实腺苷Al受体表达上调在脑缺血耐受诱导中的作用,本应用腺苷A1受体反义寡聚脱氧核苷酸(antisenseoligodexynucleatide,)阻断海马腺苷Al 受体表达的上调,观察其对CIP脑保护作用的影响。方法:采用四血管闭塞法(4 lusion,4VO)制造大鼠全脑缺血模型。42只永久凝闭双侧椎动脉的Wistar 大鼠分为以下8组进行实验: 1 Sham组:只暴露双侧颈总动脉,不阻断血流; 2单纯预缺血组(CIP组):夹闭双颈总动脉3 rain; 3损伤性缺血组:夹闭双颈总动脉8 rain; 中文摘要 4 CIP+损伤性缺血组:夹闭双颈总动脉3 min作为CIP, 再灌注2d后再夹闭8min: 5双蒸水+CIP+损伤性缺血组:于CIP前12 h和后12 h 及36h右侧脑室注射双蒸水5 ul,其它步骤同CIP十损伤性缺血组; 6单纯ARAl :暴露双侧颈总动脉前12 h和后 其余步骤同Sham组; 7 ARAl +CIP组:夹闭双颈总动脉前12 h和后12 h ul,其余步骤同CIP组; 8 ARAl +CIP+损伤性缺血组:第一次夹闭双颈总动脉前12 h和后12 h及36 h右侧脑室注射ARAl As—ODN,其余步骤同CIP+损伤性缺血组。ARAl nmol/5 Itl和20 nmoF5 pl。所有大鼠在术后或末次全脑缺血再灌后饲养7 d,断头取脑,硫堇染色,在光学显微镜下观察背侧海马组织形态并对其组织学改变进行分级(o级:无神经元死亡;l级:散在的神经元死亡;2级:成片的神经元死亡;3级:几乎全部的神经元死亡),取双侧平均等级作为统计值。高倍镜下计数海马CAl区每1 mm区段内细胞膜完整、胞核饱满、核仁清晰的锥体细胞数目,每张切片双侧背侧海马各计数2个区段取平均数为神经元密度(neuronal density,ND)。结果:Sham组和CIP组海马CAl区无明显损伤,组织学分级多为0~l级,±,±。损伤性缺血组海马CAI区有明显损伤,组织学分级(2q级) 中文摘要和ND(±)与Sham、CIP组相比明显升高或降低(p<)。C碑+损伤性缺血组海马CAl区损伤不明显,组织学分级(肛l级)和ND(±)与损伤性缺血组相比明显降低或升高(p<),表明CIP可对抗缺血造成的脑损伤,具有脑保护作用。双蒸水+CIP+损伤性缺血组、 ARAl +损伤性缺血组、Sham组和CIP组相似, 表明双蒸水或A1AR 。ARAl +CIP +损伤性缺血组中,10 nmol/5 l组海马CAl区无明显损伤, 组织学分级多为O~l级,±,其组织学特征与CIP+损伤性缺血组相似,20 nmol/5 lal组海马CAl区损伤较明显,组织学分级多为2~3级,±,与 CIP+损伤性缺血组相比有明显差异(p<)。以上结果表明,。结论:,但侧脑室注射腺苷Al受体As--ODN 可阻断