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荧光 PCR 沙眼衣原体(CT)检测试剂盒
PCR-Fluorescence Diagnostic Kit for Chlamydia Trachomati
使用说明书
【前言】
本试剂盒采用聚合酶链式反应(PCR)结合 Taqman 荧光探针技术对分泌物拭子中的沙
眼衣原体(Chlamydia Trachomatis)的特异性 DNA 核酸片段进行检测,本品对 CT 的检测灵敏
度为 10 病原体/ml。(供研究使用)。
【规格】 20 人份,-20℃保存,有效期 6 个月
【试剂盒组成】
1 核酸提取液 600ul 5 阴性对照(HBV) 10ul
6 CT 定量阳性对照 1 号 10ul
×106copy/ml
3 CTPCR 反应液 480μ 7 CT 定量阳性对照 2 号 10ul
l ×105copy/ml
4 混合酶 40μl 8 CT 定量阳性对照 3 号 10ul
×104copy/ml
【适用仪器】
本试剂盒适用于 PE5700、7700、LightCycler、FTC-2000 等荧光 PCR 仪。
【样本采集和处理】
生殖泌尿道拭子的采集方法为:高压灭菌的特制棉拭子,伸入男性尿道口或女性宫颈口上 1-2
厘米,旋转一周,停留约 10 秒钟后取出,将棉拭子头放入盛有 1 毫升无菌生理盐水的样本冷冻
保存管中,从颈部剪断拭子,使拭子头浸入盐水中,反复漂洗。(漂洗液在-20℃保存,长期在-70
℃保存)
标本漂洗液(试剂盒中的阳性对照、阴性对照可以不要处理,直接使用)的处理方法为:各取
200μl(冻存标本使用前在室温溶解,旋涡振荡 10 秒),15,000rpm 离心 10 分钟,用移液器吸
弃上清,保留沉淀。在上述离心沉淀中加入 30μl 核酸提取液,振荡器上振荡 10 秒后 100
℃沸水浴 10 分钟后,15,000rpm 离心 10 分钟,取上清液 4ul 做 PCR 扩增。
【试剂准备】
按样品数(样品数=血清标本数+对照品数+定量阳性对照 3 个)n 取 CT PCR 反应液 n×
24ul、混合酶 n×2ul 混于一离心管中,旋涡振荡器上振荡混匀 10 秒,按每管 26ul 分装于反应
管中。将上述处理好的标本上清液和定量阳性对照 1 至 3 号(务必振荡混匀数秒)各取 4ul 分
别加入反应管中,混匀,低速离心数秒,立即进行 PCR 扩增反应。
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【PCR 扩增】
FTC2000、PE5700、7700、icycler 荧光仪的程序设置
37℃反应 2 分钟,然后 93℃保温 5 分钟,再按 93℃30 秒→55℃30 秒→72℃40 秒循环 40 次。
lightcycler 荧光仪的程序设置
反应管置于 LightCycler 自动荧光 PCR 仪上,37℃反应 2 分钟,93℃2 分钟,再按 93℃5
秒→55℃10 秒→72℃20 秒循环 40 次,每个循环的升降温速率为 20℃/S,每个循环在 60℃30
秒处进行荧光检测设置。
【结果分析与判断