华师分子生物学实验考试答案整理.doc

华师分子生物学实验***整理一、名词解释:1、聚合酶链式反应是模拟DNA的复制过程,在体外特异性扩增DN***段的方法,从而获得大量的同一序列DNA。2、质粒存在于许多细菌以及酵母菌等生物中,是细胞染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子。3、星号活性在非理想的条件下,内切酶切割与识别位点相似但不完全相同的序列,这一现象称星号活性。有人提出,这种”星号”活性可能是内切酶的一种普遍特性(1)如果提供给相应反应条件,所有内切酶都会出现非特异性切割。4、限制性内切酶可以识别DNA的特异序列,并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶,简称限制酶。5、转化是某一基因型的细胞从周围介质中吸收来自另一基因型的细胞的DNA而使它的基因型和表现型发生相应变化的现象。该现象首先发现于细菌。6、转化子受体菌直接吸收了来自供体菌的DN***段,通过交换,把它组合到自己的基因组中,从而获得供体菌部分遗传性状的现象转化后的受体菌,称转化子transformant7、重组子两个突变位点之间可发生交换产生野生型的最小单位,即不能由重组分开的基本单位。重组子(binant)另一定义是指,含有重组DNA分子的转化细胞。8、感受态细胞细胞经过一些特殊方法(电击法、CaCl2法、RbCl(KCl等化学试剂法)的处理后,细胞膜的通透性发生了暂时性的改变,ponentcells)。二、深刻理解和掌握碱裂解法提取质粒DNA的原理,以及溶液I、溶液II和溶液III的主要成分及其在实验中所起的作用。为何出现较多的RNA污染,如何解决RNA污染的问题?(碱裂解可以利用变性和复性的差异较有效地区分质粒和较大的DNA(如基因组DNA),但是不能区分同样是较小分子的RNA和质粒DNA,因为两者虽然有单链和双链的区别,RNA内部可形成二级结构,但是他们的分子量差异不大,变性和复性行为上没有差异。加入RNA酶可水解RNA污染。)基本原理质粒的分离是利用质粒DNA与染色体DNA在变性与复性中的差异来达到的目的。当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时,蛋白质与DNA发生变性,由于染色体DNA与质粒DNA拓朴构型不同,染色体DNA双螺旋结构解开,而共价闭环质粒DNA的氢键虽被断裂,但两条互补链彼此相互盘绕仍会紧密地结合在一起。当加入中和液后,溶液pH调恢复至中性,在高盐浓度的情况下,染色体DNA之间交联形成不溶性网状结构并与蛋白质-SDS复合物等形成沉淀;不同的是,质粒DNA复性迅速而准确,保持可溶状态而留在上清中。这样,通过离心可沉淀大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋白质。除去沉淀后上清中的质粒可用酚***仿抽提进一步纯化质粒DNA。溶液Ⅰ:葡萄糖(50mmol/L)Tris·HCl(25mmol/L,)EDTA(10mmol/L)溶液Ⅱ:NaOH();SDS(1%,新鲜配制,常温保存)溶液Ⅲ:60ml5mol/LKAC;;;葡萄糖的作用是增加溶液的粘度,减少抽提过程中的机械剪切作用,防止破坏DNA。EDTA的作用是螯合掉Mg2+、Ca2+等二价金属离子,防止DNA酶对质粒分子的降解作用。Tris•Cl能使溶菌液维持溶菌作用的最适PH范围。SDS的作用:破坏细胞膜;解聚核蛋白并与蛋白质分子结合使之变