抗组氨酰-ｔＲＮＡ合成酶单克隆抗体的制备及初步鉴定（医学论文）.doc

抗组氨酰-ｔＲＮＡ合成酶单克隆抗体的制备及初步鉴定（医学论文）.doc抗组氨酰-tRNA合成酶单克隆抗体的制备及初步鉴定【摘要】制备均一性和特异性高的抗组氨酰-tRNA合成酶抗体,为研究皮肌炎和多肌炎的检测提供方法,为制备检测试剂盒提供原料。【方法】采用常规融合和间接ELISA检测法,获取杂交瘤细胞株;ProteinGSepharose4FF和SephadexG50结合对含有单克隆抗体的腹水进行纯化;SDS-PAGA电泳技术进行单克隆抗体的鉴定。【结果】筛选获得了2株稳定分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为WO01和W002;杂交瘤细胞克隆后,100%的检测孔保持了分泌抗组氨酰-tRNA合成酶抗体的能力;腹水纯化达到了较理想的效果;该2株单克隆抗体能特异性针对组氨酰-tRNA合成酶,并能跟天然的蛋白结合。【结论】所制备的均一性和特异性高的抗组氨酰-tRNA合成酶抗体,可直接用于在ELISA、免疫印迹、免疫组化学等研究方面,达到了试验的目的。【关键词】组氨酰-tRNA合成酶抗组氨酰-tRNA合成酶单克隆抗体鉴定Abstract:[ObjectivejToproduceanti-histidyl-tRNAsynthetase,whichenjoyhighdegreeofhomogeneityanddistinction,topdethetestmethodsfortstudyofthediseasesofdermaitisandpolymyositis>toproducemattestliquid.[Methods]binedmethodsableandindirectELISAtopurhybridomacell1ines;bineduseofPteinGSepharose4FFandSephaxG50;toidentifymonoclonalWOtibodywiththeelecttechnique•[Results]omacell02,havetidy1-tRNArophoresTwo1ines,namedbeenfoundinhcansecreteWOOtheant1andi-hissynthetasemonoc1ona1antibodystab1y•Afterthecel1sofhybridomabeingc1oned,100%checkingholeskeepthecapabi1ityofsecretinganti-histidy1-,,posemold,andtointegratewithnatura1albumen.[Conclusion]Theanti-histidyl-ive,whichcanbeuseddirect1yintheresearchofELISA,,:histidyl-tRNAsynthetase;anti-histidyl-tRNAsynthetase;monoclonalantibody;identification抗组氨酰-tRNA合成酶抗体是一类结缔组织病中的多肌炎(po1ymyositis)和皮肌炎(dermatomyositis,PM/DM)的标志性自身抗体。PM/DM指横纹肌弥漫性炎症疾患,主要累及对称性的近端肢带肌,颈和咽部肌肉无力和萎缩,严重者导致心肌、呼吸肌群受累,引起死亡。只出现肌痛肌无力现象者称多肌炎;在多肌炎的基础上,出现典型皮疹者称皮肌炎。PM/DM是自身免疫性疾病,临床检验发现25%〜30%的患者含抗组氨酰-tRNA合成酶抗体[1](临床上又称抗J。-1抗体),而其他抗合成酶抗体在PM/DM中的阳性率仅为1%〜3%,其中PM的阳性率为30%〜40%[2],尤其是那些同时发生肺间质病变的患者[3]。许多研究者臻力于PM/DM的临床症状、诊断和治疗的研究,并研发出了检测抗J。-1抗体的试剂盒。但一直以来,对PM/DM病因的研究缓慢,报道极少,发病机理尚不清晰。本研究旨在制备均一性和特异性高的抗组氨酰-tRNA合成酶抗体,为研究皮肌炎和多肌炎的检测方法提供依据,为制备检测试剂盒提供原料。-tRNA合成酶(histidyl-tRNAsynthetase),由复旦大学生命科学院季朝能教授课题组提供;小鼠骨髓