植物细胞骨架的光学显微观察.ppt

植物细胞骨架的光学显微观察观察光学显微镜下细胞骨架的结构,对细胞骨架的分布,膜骨架,核骨架,胞间连丝等进行初步的研究。实验目的实验原理细胞内脂质和大部分蛋白质可与去垢剂 Triton-100 形成去垢剂-蛋白/脂质复合物,从而溶于水中被提取, 细胞骨架蛋白与之结合成纤维状,保持其在生活细胞中存在的状态。之后用考马斯亮蓝 R250 对蛋白质染色,使骨架系统在光学显微镜下可见,从而对其进行观察研究。细胞骨架是指在细胞中支持和连接细胞各组分,与细胞运动有关的结构, 参与胞内物质运输、细胞运动、分泌吸收、细胞通讯、有丝分裂等。包括微管、中间纤维、微丝。实验用品器材: 显微镜、 50ml 烧杯、滴管、容量瓶、载玻片、盖玻片、镊子。试剂: M一缓冲液, 6m mol / L PH6 .8磷酸缓冲液。 1% Triton X 一 100 ,用 M一缓冲液配 %考马斯亮蓝 R250 ,其溶剂是甲醇 , 冰乙酸 7ml ,蒸馏水 。 3%戊二醛,用 6m mol /L磷酸缓冲液(PH6 . 8)配制。 5%、 7%、 95 % 乙醇。叔丁醇、正丁醇、二甲苯、树胶。材料: 洋葱鳞茎。实验方法(一)取洋葱鳞茎内表皮细胞(约lcm 2 大小)若干片温于装有 50ml 烧杯中,使其下沉。 ( 二)吸去磷酸缓冲液,用 1%Triton X一100 处理 20—30分钟。 ( 三)吸去 Triton X —l00,用 M一缓冲液洗 3次,每次 10分钟。. ( 四)3%戊二醛固定 —1小时(对照组开始处理)。 ( 五)PH 磷酸缓冲液洗 3次,每次 10分钟。 ( 六)%考马斯亮蓝 R250 染色 20—30分钟。 ( 七)用蒸馏水洗 1—2次,材料置于载玻片上,加盖玻片,即可镜检。 2017-1-1 如作永久制片,可使样品,顺序通过如下试剂: 50%乙醇, 70%乙醇。 95%乙醇, 95%乙醇和叔丁醇混合液(1:1),每次 5一10分钟,或正丁醇→正丁醇二→甲苯二→甲苯,每次 5—10分钟。然后捞取样品,平展于载玻片上,中性树胶封固。 2017-1-1 植物细胞骨架微丝结构图 2017-1-1 2017-1-1 用 Triton