生化仪器中的空白定标和质控.ppt

生化中的定标和空白?定标的意义:定标就是要找出一个参考点,就是一个K值(或F值)。它是由仪器与试剂状态确定下来的。当我们测定一个标本时,无论您是用手工的方法或全自动生化分析仪,测出来的值只是一个吸光度,这个吸光度对我们没有什么意义,我们要把这个吸光度转化成一个浓度或是酶的活性。那就要乘上一个K值,计算并打印出来的结果对我们就有意义了。K值就是我们通过定标找出来的。一般上最低要求是由试剂空白与标准品。经过仪器测定出两个吸光度。K=标准浓度/(A标准-A试剂空白)标准液的浓度我们是知道的,这两个吸光度可以由仪器测出,这样就得出一个K值。无论什么样的标本,用其吸光度乘以K值我们就得到了答案。因此,K值具有非常决定性的意义,可以决定标本的准确性。K值的决定因素:我们看看K值会受到什么影响呢?第一,标准液的浓度一定要准确(标准液最好与标本一样是以血清为基质的)。第二,标准液的吸光度与试剂空白的吸光度一定要准确。吸光度受仪器状况、试剂状况的影响,如果您的仪器相当稳定,试剂是影响K值的一个主要因素。如何确定K值是正确的?一般我们用质控血清来检查,最好是两种水平的质控来检查,如果质控结果很好,可以说K值是准确的,用这个K值计算出来病人的结果也是准确的,所以K值非常关键。K值的真面目:K值实际上代表了斜率,截距代表试剂空白,试剂空白每天都在变化,所以K值的稳定性决定您的仪器与试剂,如果仪器与试剂都十分稳定,那K值也很稳定。多长时间定一次标合适?这要看您试剂的稳定性,质控结果不好,有些项目做试剂空白可以解决,有些项目要做两点定标。酶的项目如何确定K值:一是计算出来的理论K值;K=(TV×1000)/(SV×L×ε)二是用有酶项目的定标液得出K值:目前各公司可以提供多项目的定标液,不仅有底物类的项目,也有酶类的项目。生化检验中的各种空白概念?1、试剂空白:由于生化测试测量的吸光度为相对吸光度,所以从理论上说,所有终点法的测试都需要把试剂本身的吸光度扣除。试剂本身的吸光度就是试剂空白。测量方法是按照正常测试的试剂和样本量?把样本换成蒸馏水来测量。在传统手工方法中,每次测定都要做至少三个管:测定管、标准管、空白管。其中空白管是试剂加蒸馏水,测出来也就是试剂空白。因为操作环境、仪器状态、试剂稳定性等变异,所以要求每次都要测定试剂空白,称为实时试剂空白。在全自动分析仪上,大体上是模拟手工操作。但许多全自动分析仪为追求速度,在设计上采用一些折中方法来测定试剂空白。以日立全系列生化仪为例。该系列分析仪是做不了实时试剂空白,因为它们全是先加入样本后加试剂,为了折中,只好在定标时做一个试剂空白,保存起来,需要扣除试剂空白时再减这个预先保存的值。这种做法,对于比较稳定的试剂来讲,对结?果影响不大。通俗的讲,日立的仪器工作流程中首先是将标本加入到比色杯中,然后依次加入R1试剂、R2试剂,所以试剂空白在每个测定项目曲线中是无法看到的。但是7600从CALIBRATION中是可以看到的,S1ABS就是代表试剂空白吸光度,在CALIBRATION画面里的下方找到ReactionMonitor(反应监察),其中STD(1),日立仪器会连续做两次测定,所以你看到FIRST和SECOND两条,计算时是取他们的平均值。做试剂空白目的之一就是观察试剂是否稳定,积极采取措施纠正。对于日立的这种试剂空白测定很多仪器都采用这种方法,也叫做试剂空白校准。总的说来,自动生化仪上的试剂空白一般表现为零点吸光度,该吸光度是通过校准确立的。?2、样本空白:由于溶血、脂血、黄疸等情况,会导致样本本身的吸光度对测试结果造成影响。所以对样本本身吸光度的测量,即样本空白,可以去除这方面的影响。测量方法是按照正常测试的试剂和样本量,把试剂换成蒸馏水或生理盐水来进行测量。自动生化仪上,很难界定样本空白。与消除样本空白有关的大约有如下几点:a).在双试剂测定时,加入试剂1和样品后的吸光度可一定程度上扣除样本空白,所以有单试剂不能扣除样本空白的说法。b).现在优质的试剂的抗干扰能力都比较强,比如有些双试剂,R1加入后先和样本孵育一段时间,将血红蛋白、脂肪?胆红素等反应掉,再加入R2开始测定反应。在一定范围内都可以消除样本空白。c).,选择两个波长和,使干扰组分在这两个波长处的吸光系数相等,而使待测物质在两波长处的吸光系数有显著差别。以两波长分别测定分析溶液的吸光度,以两个吸光度值之差(△A)计算。).有些仪器,例如日立系列,有专门的“血清信息”功能的设置。做法都是单独占用一个空白通道来计算,这也叫做样品空白校准。3、水空白:比色杯在加入水以后的吸光度。水空