核型分析图像处理.doc

核型分析图像处理.doc核型分析实验屮的图像处理核型分析是生物学、医学领域中常用实验技术Z—[1・2],传统核型分析T作主要是通过制备、选择与获得分散良好的屮期分裂相细胞示,再经过较繁杂的操作流程才可获得较好的实验结果[3]。为使核型分析更趋便捷,图像处理与分析结果更可靠,目前许多公司生产出全〔I动专业核型分析系统[4・5],但价格昂贵且操作要求高,在一般教学和科研实验屮难以推广运用。AdobePhotoshop是著名的图像处理与分析软件,已有文献表明利用这款软件可进行染色体核型分析,较传统方法效率更高[6]。但现有文献仅粗略介绍了Photoshop在核型分析屮的应用,同时还存在不足Z处。鉴于此,本文拟建立Photoshop处理与分析染色体图的简便操作规程。文屮使用的软件版木是AdobePhotoshopCS3Extended,文中所涉及到的名词、工具和使用方法均参考该软件自带的帮助文件及相关教程[7]。1材料与方法实验材料选用6〜8周龄的纯系小鼠(Musnmscu・lus,2n=40),体重为20g左右,实验试剂与方法具体参考文献[3]。将制备好的载玻片置于显微镜下,观察标本的制备效果,寻找较为满意的屮期细胞分裂相。通过显微镜与数码相机或电脑的数据接口他可将染色体原始照片扫描进电脑),形成并储存成图片格式([7]⑴打开图像文件,点击“图像(1)>模式(M)>RGB颜色(R)”,将图像调整成RGB模式。⑵点击图层面板,双击“背景”一“新建图层”一“确定”按钮,使背景图层转变为图层00⑶点击“通道”面板,点击面板右上方三角形按钮,点击“新建通道”一“色彩指示”一“所选区域(S)”〜“确定”按钮。(4)选择“红、绿、蓝”通道中黑白对比最明显的通道,将其复制成新通道副木。⑸使用快捷键“Ctrl+L”,出现色阶窗口,使用窗口下方吸管的T具,三个吸管T具从左到右分别代表“暗、屮间色和亮”。⑹点击“暗”吸管T具,尽量在染色体区域设置取样点,使所需染色体区域尽可能显示成黑色;点击“亮”吸管工具,尽量在染色体周边区置取样位点,使得染色体周边区域显示成白色,但不能使染色体区域明显变片。⑺调整好色阶示,若图像非染色体区域存在其它斑点,点击“橡皮擦工具”,设置模式为“画笔”,以实际需要调节其大小,将不需要区域擦除成白色;若发现有染色体区域出现部分残缺,则用“画笔”工具将该残缺区域涂抹成黑色,即可获得完整的染色体区域(图2)o⑻适当调整通道副本的对比度,点击“图像(1)>调整(A)>亮度/对比度(C)”,使染色体区域和非染色体区域明对比度适当增大。⑼点击“选择(S)>载入选区(L)”,出现“虚线框”选择区域;点击“图层”面板,选择“图层0”。(1®若“虚线框”选择的区域没有完全将染色体区域包括进去,则点击“选择(S)>修改(M)>扩展(E)”,出现“扩展选区”对话框,可根据需要来扩大选区。(11)使用快捷键“Ct「l+J”复制选择区域并建立新图层;而后删除图层0。(⑵将图像另存为png或gif格式的文件(图1)。©,若将文件保存成bmp,jpeg等格式的图,PSCS3则白动将透明背景部分转换成白色背景,此时白色表示仍然有颜色信息,而透明表示没有任何颜色信息。②若染色体原图为荧光照片,先