发光免疫检测技术的临床应用94讲课资料.ppt

发光免疫检测技术的临床应用及其应注意的问题杨晓林博士北京大学医学部研究员中国生物物理学会光生物学专业委员会副主任委员国际生物发光和化学发光学会(ISBC)学术理事CouncilmemberofscientificadvisoryboardofInternationalSocietyonBioluminescence&Chemiluminescence由于化学反应(通常是氧化)产生电子能级处于激发态的物质,后者通过跃迁释放能量产生光子,从而导致的发光现象。化学发光(Chemiluminescence)生物发光和化学发光均属于冷光,即发光不是由于发光体温度升高所至,发射波长也与其温度无关按化学反应类型化学发光的分类酶促化学发光:辣根过氧化物酶系统碱性磷酸酶系统黄嘌呤氧化酶系统非酶促化学发光:吖啶酯系统草酸酯系统三价铁-鲁米诺系统闪光(Flash):按发光持续时间发光时间在数十分钟以上,如:HRP-Luminol系统AP-AMPPD系统黄嘌呤氧化酶系统无须原位进样、以速率法测量。发光时间在数秒内,如吖啶酯以原位进样(InSituInjector)和时间积分法测量辉光(Glow):鲁米诺及其衍生物的增敏化学发光系统H2O2+NH2OONHNHN2OH-HRPNH2CO2-CO2-+Photon(425nm)ROHROHNSRBOHOH增强剂(Enhancer)商业化产品中常见的化学发光系统AMPPD及其衍生物的化学发光系统+*光子(477nm)APOOOCH3OPO32-O-OOOCH3OO-OOCH3商业化产品中常见的化学发光系统CH3C=OORN+OH-H+H2O2+H2O+ROH光子+CO2+CH3C=OORNHOCH3C=OORNHOOCH3ONCH3ONC=OO商业化产品中常见的化学发光系统吖啶酯化学发光系统发光信号检测光敏二极管、光敏电池、D)结构简单、性能稳定但灵敏度低、线性范围较窄。主要特点原理光信号光电转换器件电压或电流信号放大单光子计数器是目前高灵敏度发光分析仪的核心部件光电倍增管高压高速放大器高速比较器高速分频器发光样品产生光子激发光阴极产生光电子在阳极上形成较强信号脉冲信号相对发光单位数字脉冲(RLU)在各打拿极之间得到能量和数目的倍增单光子计数式发光检测仪计算机打印机发光仪控制模块发光仪执行模块控制器程控高压计数/贮存器单光子计数器样品运动/定位装置程控自动门锁及检测装置原位注射泵