微生物的利用、酶的应用复习.ppt

微生物的利用、酶的应用-*-、兼性厌氧的肠道杆菌,在肠道中一般对人无害,属原核生物,是基因工程中被广泛采用的工具。(1)分类:按照物理性质可分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基。在液体培养基中加入凝固剂琼脂后,制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长,可以形成肉眼可见的菌落。(2)成分:一般都含有水、碳源、氮源、无机盐和生长因子五类营养物质。还需满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质及氧气的要求。(3)制作牛肉膏蛋白胨固体培养基。制作牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤:计算→称量→溶化、调pH→灭菌→倒平板。-*-(1)获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。应根据实际情况进行消毒和灭菌。(2)消毒与灭菌的区别①消毒是指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)。消毒方法有煮沸消毒法,还有化学药剂(如酒精、***气、石炭酸等)消毒、紫外线消毒等。②灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子。灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌等。-*-(3)无菌操作要求①各种器皿必须是无菌的。②各种培养基必须是无菌的。③菌转移操作的过程必须是无菌的。(4)灭菌方法①高压蒸汽灭菌法:即用高压蒸汽灭菌锅在121℃(1kg/cm2压力)下灭菌15min。②干热灭菌法:用干热灭菌箱对耐热器具在160℃维持2h或170℃维持1h灭菌。③酒精灯灼烧法:如接种环在酒精灯火焰上灼烧灭菌。酒精灯火焰上方无菌区,可使菌转移过程在无菌条件下完成。④紫外灯照射灭菌:用紫外灯照射灭菌30min。-*-(5)消毒方法。①煮沸消毒法:100℃煮沸5~6min可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢,可用于培养器皿的消毒。②巴氏消毒法:80℃中15min或70~75℃中30min,实际生产中常用于鲜奶的消毒。③乙醇消毒法:70%乙醇杀菌能力最强,常用于实验时操作者手臂的消毒。(6)含抗生素的牛奶不能发酵为酸奶的原因:牛奶发酵成酸奶是利用乳酸菌发酵来完成的。乳酸菌属于细菌,抗生素有抑制甚至杀死细菌的作用。-*-(1)细菌培养①用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌,细菌以分裂的方式繁殖,分裂速度很快,条件适宜时,约20min可分裂一次。②如要将已有细菌培养物转移到新的培养基,一般用接种环转移带菌的培养物。-*-(2)细菌分离①划线分离法:用接种环在琼脂固体培养基表面连续划线操作,将聚集的菌种逐步分散到培养基表面。培养10~20h后,可以得到由一个细菌繁殖而来的肉眼可见的细胞群,即菌落。②稀释涂布分离法:将菌液先进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,然后进行培养。③两种方法比较:划线分离,方法简单;涂布分离,单菌落更易分开,但操作复杂些。两种方法都能将混杂在一起的微生物分离成单个细胞,并能在培养基表面形成单个菌落,以便分离和纯化菌种。-*-(1)实验目的①进行大肠杆菌的扩增,利用LB液体培养基进行细菌培养的操作。②进行大肠杆菌的分离,用LB固体培养基进行细菌的划线培养。③说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理。(2)实验步骤①灭菌:用高压蒸汽灭菌锅在121℃(1kg/cm2压力)下对LB液体培养基、LB固体培养基和培养皿灭菌15min。②倒平板:待冷却至60℃左右时,将三角瓶中的培养基在超净台上分装至几个培养皿中,制成固体培养基。③扩大培养:将大肠杆菌用接种环在无菌操作条件下接种至三角瓶中的液体培养基中,37℃摇床振荡培养12h,完成大肠杆菌培养。