淋巴瘤基因克隆性重排检测 PPT.ppt

淋巴瘤基因克隆性重排检测血液肿瘤形态学(Morphology)聚丙烯酰***凝胶电泳(PAGE)毛细管凝胶电泳(CE)荧光实时定量PCR(RTQT-PCR)一代测序(Sanger)二代测序(NGS)分子生物学(Molecular)免疫组化(IHC)流式细胞术(FCM)免疫学(Immunology)荧光原位杂交(FISH)细胞遗传学(ics)辅助诊断预后分析指导用药MRD检测血液肿瘤(常规肿瘤)检测方案-MICM综合分子检测(旌准方案)分子检测检测基因方法IG/TCR基因重排IGH,IGK,IGL,TRB,TRD,TRGGEL(PAGE)ABI(CE)NGSIGHV超突变IGHGEL(PAGE)ABI(CE)NGS基因突变EZH2,DNMT3A,IDH2…SangerNGSMoffitt,(2017).JClinOncol35(9):955--淋巴瘤3最丰富的阳性对照5BIOMED-2唯一授权的商品化试剂1全面涵盖各种T\B细胞重排类型可疑淋巴组织增生性疾病克隆性分析的“金标准”超过400例的临床样本验证,反应体系稳定,结果可靠324淋巴细胞克隆性基因重排检测产品特点B-CellReceptors(BCR)/Immunoglobulins(Ig)T-CellReceptor(TCR)淋巴细胞克隆性基因重排检测的目标分子Ig和TCR--单一基因重排,即恶性淋巴细胞5IGH,TRB&TRD:V,D,andJIGK,IGL,andTRG:VandJregions正常淋巴细胞成熟过程/良性病变多克隆性多种形式的基因重排恶性淋巴瘤发生的过程单克隆性突出单一形式的基因重排多样性与克隆性鉴别诊断:明确是淋巴组织反应性还是淋巴细胞恶性增殖辅助诊断:少见类型淋巴瘤,如肝脾T细胞淋巴瘤亚类分析:明确是B淋巴恶性增殖还是T细胞恶性增殖区分同一患者两种淋巴细胞恶性肿瘤,包括复发与继发淋巴瘤微小残留病灶监测,评估治疗效果或复发风险(NGS方法)细胞免疫治疗监测,监测回输T细胞增殖状况和淋巴组织来源肿瘤细胞清除效果(NGS)5%~15%的病例表现复杂,即使做了大量的免疫标志也可能难以鉴别其良恶性,需要进一步的手段区分。利用分子生物学手段分析Ig和TCR基因的克隆性重排被WHO公认为该疾病诊断手段的重要补充。淋巴细胞克隆性基因重排检测的临床意义基于PCR检测技术,简便、快速、成本较低,所需DNA量少,对DNA质量要求不高。灵敏度高于10%,需配制胶,安全清洁性较差。基于PCR-毛细管电泳检测技术,敏感性高,检测周期较长,结果更加直观可靠目前市场最被接受的检测方法。灵敏度无法满足MRD要求,难以定量和得到序列。新兴技术,更高灵敏度(10-6),更高分辨率,更高的通量,更广泛的应用。但成本高,仪器贵,操作复杂,时间长。(IGH,IGK,)(IGL)(TRB,TRD,)(TRG)BIOMED-2方案,唯一授权)IGHV(依据ERIC指南)IGH,IGK,TRB,TRGIGHV基于不同方法的产品系列-Invivoscribe公司大家应该也有点累了,稍作休息大家有疑问的,M系列产品是基于PCR的克隆性检测产品,是BIOMED-2唯一授权的商品化试剂,获得CE认证,以其高度的灵敏性和特异性,成为可疑淋巴组织增生性疾病克隆性分析的“金标准”。M系列产品具有精心优化的标准化试剂组成,具有最丰富的阳性对照,涵盖各种T\B细胞重排类型,经过了超过400例的临床样本验证,按照临床产品的标准进行质检和质控,反应体系稳定,结果可靠。从Biomed-2到Invivoscribe-唯一授权10